在重组DNA技术中，不常用到的酶是

根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒，回答以下问题：（已知EcoRI酶识别序列为GAATTC，识别位点为G||A）

（1）绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列为：

……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……

……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……

红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列为：

……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……

……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……

其中， DNA分子含有“目的基因”， DNA分子是“质粒”。

（2）用剪刀代表进行切割。酶切位点在（a处还是b处），此化学键称为。

（3）请用“||”在甲、乙两DNA分子上标出EcoRI的作用位点。

（4）从基因文库中获取目的基因是常用方法，基因文库实际上就是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的的群体。按照其中所含基因的量又可分为文库和文库。

（5）基因表达载体的构建是基因工程的关键步骤之一，请根据所给的条件完成下列问题：

已知有4种限制性核酸内切酶，其中1号和4号切割DNA后产生的是平末端，2和3号酶产生的是黏性末端。含目的基因的DNA片段和质粒的酶切序列如下图所示：

① 请设计酶切方案，构建最佳基因表达载体（重组质粒）。

②该重组质粒上有几个复制原点：，能用PCR技术扩增吗（能或不能）

③若用酶2和3切割重组质粒，可以得到几个DNA片段：。

若用酶2和1切割重组质粒，可以得到几个DNA片段：。

基因敲除是根据DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因敲除技术构建基因敲除动物模型是研究基因功能中较为普遍的一种方法，其基本原理如下图所示。

请回答下列问题：

（1）在将目的基因导入受体细胞前，需要构建一个基因表达载体。一个理想的基因表达载体，通常由启动子、终止子、目的基因和等四部分组成。在此过程中，所需使用的相关工具酶是。

（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常为，基因导入该细胞时，可以采用等方法。

（3）上述途径所获得的动物，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是。

（4）假设通过基因敲除构建了一个非球形红细胞性贫血(Ⅱ型)模型动物，该动物因丙酮酸激酶缺陷或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺陷，使红细胞膜变化引起红细胞自溶现象，但若向该动物注射ATP后，自溶现象可明显降低。由此可表明，基因对生物性状的控制方式之一是：。

（5）某实验小组向正常小鼠胚胎细胞内导入某“X基因”后，发现靶基因能正常转录形成mRNA,但细胞内却不再合成相应蛋白质，其原因最可能是。