基因工程中，外源DNA片段常用PCR方法扩增，扩增后需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。下表列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）含目的基因的外源DNA片段用PCR方法扩增时使用DNA聚合酶，其不同于一般生

物体内DNA聚合酶的最主要特点是　 ▲　 。PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图1为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？　 ▲　 。

（2）图2中的质粒和含目的基因的外源DNA构建重组质粒，一般不只用AluⅠ一种酶切割，原因是　 ▲　 。

（3）图2中获取的重组质粒时运用了　 ▲　 限制酶切割，切割后的质粒与目的基因片段混合，加入了　 ▲　 酶，该酶是对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？　 ▲　 。

（4）重组质粒导入受体细胞后，通常要进行检测。若要检测目的基因是否转录出mRNA，可用　 ▲　 技术；若要检测目的基因是否表达出蛋白质，可用　 ▲　 技术。

真核细胞的基因由编码区和非编码区两部分组成（如下图一示），其中编码区包括能够编码蛋白质的序列（外显子）和较易不能够编码蛋白质的序列（内含子）。在真核细胞基因表达时，首先由DNA转录出前驱ｍRNA，然后经过裁接（将内含子的转录部分切除并将外显子的转录部分连接起来）才能形成成熟的ｍRNA。但在裁接时有可能会发生选择性裁接（在裁接时可能会同时切除某一个或几个外显子的转录部分，即形成不同的裁接形式）和RNA编辑（将前驱ｍRNA上的核苷酸序列加以修改，包括碱基置换或碱基增减）。选择性裁接和RNA编辑的存在，进一步增加了蛋白质结构和功能的多样性。请分析回答：

（1）由于DNA分子的双链靠碱基之间的的氢键相结合，因而增强了DNA分子结构的稳定性。下列双链DNA结构在复制时，最不容易解旋的是（   ）

A                  B                  C

（2）选择性裁接和RNA编辑作用发生在细胞中的____________（部位）。

（3）人的apoB基因在肝细胞中表达出apoB－100蛋白质（数字表示该蛋白质含有的氨基酸数），但是在小肠细胞中， apoBｍRNA上靠近中间位置的某一个“－CAA”密码子上的“C”被编辑为“U”，因此只能表达出apoB－50蛋白质。下列有关分析中正确的是（  ）（多选）

A．apoB基因含有606个脱氧核苷酸；

B．apoB基因在肝细胞中转录的ｍRNA长度约是小肠细胞中转录的ｍRNA长度的2倍

C．apoB－100蛋白质和apoB－50蛋白质有50个氨基酸完全一样

D．apoB－100蛋白质和apoB－50蛋白质都是apoB基因的表达产物

E．apoB－50蛋白质的产生是因为apoB基因在转录时发生选择性裁接的结果

（4）科学家将人的生长激素基因导入大肠杆菌以获取人生长激素（如图二）。已知限制酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—^↓GATC—。

①目的基因可以通过____________方法获取。

②重组质粒构建过程中需要用到的酶包括___________酶和___________酶。

③据图分析，在构建基因表达载体过程中，应选用____________（限制酶I / 限制酶II）切割质粒。

④成功导入该重组质粒的细菌能否生长在含四环素的培养基上？____________；能否生长在含抗氨苄青霉素素的培养基上？____________；根据此原理可完成转基因工程的筛选（工程菌）环节。

（5）如果某基因中的一个碱基发生突变，则突变基因控制合成的蛋白质与正常蛋白（正常基因控制合成）相比____________（一定/不一定）不同，并说明两点理由？

① ________________________；②________________________。

真核细胞的基因由编码区和非编码区两部分组成（如下图一示），其中编码区包括能够编码蛋白质的序列（外显子）和较易不能够编码蛋白质的序列（内含子）。在真核细胞基因表达时，首先由DNA转录出前驱ｍRNA，然后经过裁接（将内含子的转录部分切除并将外显子的转录部分连接起来）才能形成成熟的ｍRNA。但在裁接时有可能会发生选择性裁接（在裁接时可能会同时切除某一个或几个外显子的转录部分，即形成不同的裁接形式）和RNA编辑（将前驱ｍRNA上的核苷酸序列加以修改，包括碱基置换或碱基增减）。选择性裁接和RNA编辑的存在，进一步增加了蛋白质结构和功能的多样性。请分析回答：




（1）由于DNA分子的双链靠碱基之间的的氢键相结合，因而增强了DNA分子结构的稳定性。下列双链DNA结构在复制时，最不容易解旋的是（  ）
A                 B                  C
（2）选择性裁接和RNA编辑作用发生在细胞中的____________（部位）。
（3）人的apoB基因在肝细胞中表达出apoB－100蛋白质（数字表示该蛋白质含有的氨基酸数），但是在小肠细胞中， apoBｍRNA上靠近中间位置的某一个“－CAA”密码子上的“C”被编辑为“U”，因此只能表达出apoB－50蛋白质。下列有关分析中正确的是（ ）（多选）
A．apoB基因含有606个脱氧核苷酸；
B．apoB基因在肝细胞中转录的ｍRNA长度约是小肠细胞中转录的ｍRNA长度的2倍
C．apoB－100蛋白质和apoB－50蛋白质有50个氨基酸完全一样
D．apoB－100蛋白质和apoB－50蛋白质都是apoB基因的表达产物
E．apoB－50蛋白质的产生是因为apoB基因在转录时发生选择性裁接的结果
（4）科学家将人的生长激素基因导入大肠杆菌以获取人生长激素（如图二）。已知限制酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—^↓GATC—。
①目的基因可以通过____________方法获取。
②重组质粒构建过程中需要用到的酶包括___________酶和___________酶。
③据图分析，在构建基因表达载体过程中，应选用____________（限制酶I / 限制酶II）切割质粒。
④成功导入该重组质粒的细菌能否生长在含四环素的培养基上？____________；能否生长在含抗氨苄青霉素素的培养基上？____________；根据此原理可完成转基因工程的筛选（工程菌）环节。
（5）如果某基因中的一个碱基发生突变，则突变基因控制合成的蛋白质与正常蛋白（正常基因控制合成）相比____________（一定/不一定）不同，并说明两点理由？
①________________________；②________________________。

真核细胞的基因由编码区和非编码区两部分组成（如下图一示），其中编码区包括能够编码蛋白质的序列（外显子）和较易不能够编码蛋白质的序列（内含子）。在真核细胞基因表达时，首先由DNA转录出前驱ｍRNA，然后经过裁接（将内含子的转录部分切除并将外显子的转录部分连接起来）才能形成成熟的ｍRNA。但在裁接时有可能会发生选择性裁接（在裁接时可能会同时切除某一个或几个外显子的转录部分，即形成不同的裁接形式）和RNA编辑（将前驱ｍRNA上的核苷酸序列加以修改，包括碱基置换或碱基增减）。选择性裁接和RNA编辑的存在，进一步增加了蛋白质结构和功能的多样性。请分析回答：

（1）由于DNA分子的双链靠碱基之间的的氢键相结合，因而增强了DNA分子结构的稳定性。下列双链DNA结构在复制时，最不容易解旋的是（   ）

A                  B                  C

（2）选择性裁接和RNA编辑作用发生在细胞中的____________（部位）。

（3）人的apoB基因在肝细胞中表达出apoB－100蛋白质（数字表示该蛋白质含有的氨基酸数），但是在小肠细胞中， apoBｍRNA上靠近中间位置的某一个“－CAA”密码子上的“C”被编辑为“U”，因此只能表达出apoB－50蛋白质。下列有关分析中正确的是（  ）（多选）

A．apoB基因含有606个脱氧核苷酸；

B．apoB基因在肝细胞中转录的ｍRNA长度约是小肠细胞中转录的ｍRNA长度的2倍

C．apoB－100蛋白质和apoB－50蛋白质有50个氨基酸完全一样

D．apoB－100蛋白质和apoB－50蛋白质都是apoB基因的表达产物

E．apoB－50蛋白质的产生是因为apoB基因在转录时发生选择性裁接的结果

（4）科学家将人的生长激素基因导入大肠杆菌以获取人生长激素（如图二）。已知限制酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—^↓GATC—。

①目的基因可以通过____________方法获取。

②重组质粒构建过程中需要用到的酶包括___________酶和___________酶。

③据图分析，在构建基因表达载体过程中，应选用____________（限制酶I / 限制酶II）切割质粒。

④成功导入该重组质粒的细菌能否生长在含四环素的培养基上？____________；能否生长在含抗氨苄青霉素素的培养基上？____________；根据此原理可完成转基因工程的筛选（工程菌）环节。

（5）如果某基因中的一个碱基发生突变，则突变基因控制合成的蛋白质与正常蛋白（正常基因控制合成）相比____________（一定/不一定）不同，并说明两点理由？

① ________________________；②________________________。