基因敲除是根据DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因敲除技术构建基因敲除动物模型是研究基因功能中较为普遍的一种方法，其基本原理如下图所示。

请回答下列问题：

（1）在将目的基因导入受体细胞前，需要构建一个基因表达载体。一个理想的基因表达载体，通常由启动子、终止子、目的基因和            等四部分组成。在此过程中，所需使用的相关工具酶是                    。

（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常为              ，基因导入该细胞时，可以采用                    等方法。

（3）上述途径所获得的动物，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是       。

（4）假设通过基因敲除构建了一个非球形红细胞性贫血(Ⅱ型)模型动物，该动物因丙酮酸激酶缺陷或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺陷，使红细胞膜变化引起红细胞自溶现象，但若向该动物注射ATP后，自溶现象可明显降低。由此可表明，基因对生物性状的控制方式之一是：                    。

（5）某实验小组向正常小鼠胚胎细胞内导入某“X基因”后，发现靶基因能正常转录形成mRNA,但细胞内却不再合成相应蛋白质，其原因最可能是              。

基因疫苗是指将编码外源性抗原的基因导入人和动物体内,让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：
（1）培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛应用的工程技术有           。（写出2种）
（2）基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、          、          、          等部分。  
（3）检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，分子水平上的检测方法是从转基因牛中提取蛋白质，用相应的抗体进行                  ，如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白。
（4）为提高胚胎的利用率，可采用       技术。由此可获得       相同的多个胚胎，应该选用                                        胚进行分割．
（5）胚胎工程的最后一道工序是               。

（17分）基因工程又叫基因拼接技术。
（1）在基因工程技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的      为模板，  　  成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成目的基因。
（2）基因工中常用的受体细胞有细菌、真菌、 　　　　 。
（3）在基因工程技术中，DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 　　　　 和  　　　 。
（4）大肠杆菌质粒经EcoRI（一种限制性核酸内切酶）切割后所形成的黏性末端之一是 ，则EcoRI的识别序列和切点是_____________________（切点用箭头标在序列上）。
（5）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，约80%的转基因植物都是通过这种方法获得。除此法之外，还有____________和____________等。
（6）聚合酶链式反应（PCR技术）是在实验室中以少量样品DNA制备大量DNA的生化技术.某个DNA样品有1000个脱氧核苷酸，已知它的一条单链上碱基A:G:T:C=1:2:3:4，则经过PCR仪五次循环后，将产生    个DNA分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是          个。请指出PCR技术与转录过程的二个不同之处：
①                                                                 。
②                                                                 。
（7）一个基因表达载体的组成，除了目的基因之外，还必须有     ，      以
及            。
（8）在目的基因的监测与鉴定工作中，又是需监测目的基因是否翻译成蛋白质，监测的方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行            杂交，若有          出现，表面目的基因已经形成蛋白质产品。

基因疫苗是指将编码外源性抗原的基因导入人和动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：
（1）培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛应用的工程技术有          。（写出2种）
（2）基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、          、          、          等部分  
（3）检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，分子水平上的检测方法是从转基因牛中提取蛋白质，用相应的抗体进行                  ，如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白。
（4）为提高胚胎的利用率，可采用       技术。由此可获得       相同的多个胚胎，应该选用                                        胚进行分割。
（5）胚胎工程的最后一道工序是               。

（7分）基因敲除是根据DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因敲除技术构建基因敲除动物模型是研究基因功能中较为普遍的一种方法，其基本原理如下图所示。

请回答下列问题：
（1）在将目的基因导入受体细胞前，需要构建一个基因表达载体。一个理想的基因表达载体，通常由启动子、终止子、目的基因和           等四部分组成。在此过程中，所需使用的相关工具酶是                   。
（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常为             ，基因导入该细胞时，可以采用                   等方法。
（3）上述途径所获得的动物，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是      。
（4）假设通过基因敲除构建了一个非球形红细胞性贫血(Ⅱ型)模型动物，该动物因丙酮酸激酶缺陷或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺陷，使红细胞膜变化引起红细胞自溶现象，但若向该动物注射ATP后，自溶现象可明显降低。由此可表明，基因对生物性状的控制方式之一是：                   。
（5）某实验小组向正常小鼠胚胎细胞内导入某“X基因”后，发现靶基因能正常转录形成mRNA,但细胞内却不再合成相应蛋白质，其原因最可能是             。