如图表示某种细菌细胞中的一个反应程序，一种氨基酸在酶的作用下产生另外的氨基酸。①－⑥代表不同的氨基酸，且这6种氨基酸对生命活动都是必需的。V－Z代表不同的酶。原始种的细菌只要培养基中有氨基酸①就能生长，而细菌的变异种在有①②⑤时才能生长，该种细菌的变异种中不存在的酶是

A、V、Z       B、W、Y      C、Y、Z        D、V、W

（08北京海淀一模）(18分)科学家用脉孢霉(一种真菌)为实验材料，对基因的功能进行了深入的研究。

(1)野生型脉孢霉在基本培养基上即可生长，基本培养基只含有野生型脉孢霉生长所必需的最低限度的营养成分。基本培养基中所含的营养要素可以归纳为：              。

(2)科学家用X射线处理野生型脉孢霉后，发现部分菌株在基本培养基上不能生长。用X射线处理脉孢霉的目的是              。

(3) 为确定这部分菌株在基本培养基不能生长的原因，科学家们继续做实验：在基本培养基中补充了某种物质，原来不能生长的菌株有的能够生长了。从而获得了三种与野生型菌株不同的突变型菌株A、B、C。实验结果见下表：

实验分析：在哺乳动物的肝脏中，精氨酸是经过“前体→鸟氨酸→瓜氨酸→精氨酸”的途径合成的。受这种生化观点的启发，科学家们认为：野生型脉孢霉可以利用基本培养基中的某类物质(前体)，合成了一系列氨基酸，这些氨基酸应该属于脉胞霉的      代谢产物。

    三种突变型菌株均能在添加了精氨酸的培养基中生长，说明它们均丧失了          的功能。突变菌株B可在添加了瓜氨酸的培养基中生长，但不能在添加鸟氨酸的培养基中生长，原因是它                               。

 (4) 生化反应都由特定的酶来催化，一个基因突变导致了一个生化反应的不能进行，科学家们由此提出了“一个基因控制合成一个酶”的假说。在进一步的猜测中，有一种观点认为基因突变使细胞合成了一种结构发生改变而失去活性的“酶”。于是有人继续探讨这个问题。一种免疫反应可检测到失活“酶”的存在，科学家们利用这种方法做了下面的实验。

    第一步 设法得到影响上述生化反应的酶，将其纯化制成酶制剂，注射到家兔体内，获得相应的抗酶抗体(能和正常的酶及失活的“酶”发生沉淀反应)。酶制剂在免疫学上属于            。

     第二步 在培养皿的琼脂上挖四个圆孔(如图21所示)，在0号圆孔中加入抗酶抗体，在2号圆孔中加入野生型菌株提取物，3号圆孔中加入某突变菌株提取物，则1号圆孔中需加入             作为对照。

     第三步0、1、2、3号圆孔中的物质各自在琼脂中扩散，观察1、2、3号圆孔与0号圆孔之间是否出现                  。

     实验结果分析：若出现                                     结果时，则支持“基因突变使细胞合成了一种失去活性的‘酶’”的推断。

（16分）Ⅰ.（8分）土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌，它带有一个大的质粒叫Ti质粒，它是携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。结构及转化过程如图所示，回答相关问题：

（1）为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即祛除瘤基因，将抗旱基因转移至________，然后在一定条件下将外植体在含土壤农杆菌的稀释培养基上培养，此时修饰的T—DNA转入植物细胞并整合到植物基因组中。以上过程需要的工具有                                          。

（2）将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选，发生转化的外植体开始增殖，形成________      ，通过产生不定芽再长出整个植物。

（3）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，可以直接在________水平对转基因植物与非转基因植物进行比较。

Ⅱ．（8分）请回答基因工程方面的有关问题：

(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如图所示）。

（1）图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。

①从理论上推测，第四轮循环产物中不含有引物B的DNA片段所占的比例为      。

②在第    轮循环产物中首次出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

（2）PCR反应体系中含有的DNA聚合酶具有           特点，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为                   。

生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M（单细胞）产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图1）。

1、筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供             ，培养基灭菌采用的最适方法是                法。

2、图2是采用纯化微生物M培养的两种接种方法接种后培养的效果图。则获得图A效果的接种方法是           ，图B效果的接种方法是             。

3、若需人工大量克隆脂肪酶基因，可应用___         _技术，该过程需要的特殊酶是             。

4、常用血球计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm）分两类，一类是每个计数室包括16个中格，每个中格包括25个小格，这种计数板抽样计数时只要统计四个顶角的中格即可；另一类是是每个计数室包括25个中格，每个中格包括16个小格，这种计数板抽样计数时除了统计四个顶角的中格外还要计数中央的一个中格。在实验中如需定期测定培养液中微生物M的细胞数量，则在取出的样液中要立即加入固定液，其目的是              。如果将样液稀释100倍，采用血球计数板计数时，观察到的计数室中细胞分布如图2所示，则培养液中微生物M的 细胞密度为              个/L.

5、研究人员拟将某目的基因导入微生物M 细胞中，为此需要选择合适的质粒作为运载体。下图所示X－1、X－2、X－3、X－4为四种相关质粒，其中Tc^r表示抗四环素的抗性基因，Ap^r表示青霉素抗性基因，E1和E2表示两种限制酶的识别位点。基因工程中限制酶作用的化学键是                           。若将这四种质粒分别导入微生物M，然后将微生物M菌液分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上培养。则在这两种培养基上均不能生长的M细胞类型有________________。

6、已知Tc^r长度为1.5kb(1kb=1000个碱基对)，Ap^r长度为0.5kb。如果X－1用E1酶切，产生0.5kb碱基片段和8.5 kb碱基片段,那么质粒X－2用E2酶切后的片段长度为_____________对碱基