2008年1月7日，东北农业大学培育出我国第二代绿色荧光蛋白转基因克隆猪。研究人员是先从一种特殊水母中提取绿色荧光蛋白基因，然后把该基因经过处理后转移到培养的猪胎儿成纤维细胞的基因组中，再把转基因体细胞的细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中构建成转基因胚胎。再经过手术移植入受体母猪，经过发育最终获得绿色荧光蛋白转基因克隆猪。

下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图。请据图回答：

   （1）过程①和②必需用到的酶是          。

   （2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有                才能构成一个完整的基因表达载体。

   （3）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射          的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到         期即可通过显微操作将其细胞核去除。

   （4）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素．激素．氨基酸．核苷酸等营养成分，以及       等物质。

   （5）如果想同时得到多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，可通过胚胎分割技术得以实现。但应选择发育良好．形态正常的              期胚胎进行操作，且要注意                  ，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

   （6）与一般的繁育良种动物方式相比较，胎胎移植的优势是                       。

分析回答有关生物工程中的问题：（8分）

日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：

（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是做为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________                                 

 _________。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________                              ___。

(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。

(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______              ___                            。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。

(5)在培养重组细胞时，培养液中通常含有_____________、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。

(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出三项）。

2008年1月7日，东北农业大学培育出我国第二代绿色荧光蛋白转基因克隆猪。研究人员是先从一种特殊水母中提取绿色荧光蛋白基因，然后把该基因经过处理后转移到培养的猪胎儿成纤维细胞的基因组中，再把转基因体细胞的细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中构建成转基因胚胎。再经过手术移植入受体母猪，经过发育最终获得绿色荧光蛋白转基因克隆猪。

下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图。请据图回答：

   （1）过程①和②必需用到的酶是          。

   （2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有                才能构成一个完整的基因表达载体。

   （3）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射          的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到         期即可通过显微操作将其细胞核去除。

   （4）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素．激素．氨基酸．核苷酸等营养成分，以及       等物质。

   （5）如果想同时得到多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，可通过胚胎分割技术得以实现。但应选择发育良好．形态正常的              期胚胎进行操作，且要注意                  ，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

   （6）与一般的繁育良种动物方式相比较，胎胎移植的优势是                       。

我国首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪。其中2头在转基因性状上，明显表达出绿色荧光蛋白的特征，在紫外光源激发下其口、蹄及舌头可以观察到明显的绿色荧光。此次绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪的试验成功，意味着我国体细胞在下列哪项技术已趋于成熟，这标志着我国在转基因克隆猪技术研究领域已经步入世界先进水平行列。克隆猪采用的技术有（    ）

A．细胞核移植     B．细胞融合     C．蛋白质工程     D．单克隆抗体

（8分）日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：

（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________                                   _________。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________                              ___。

（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______   ________                            。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。

（5）在培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和             ___等。

（6）以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出2项）。