PCR(多聚酶链式反应)技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，如图表示合成过程。下列说法错误的是                             (　　)

A．甲过程高温使DNA变性解旋，该过程不需要解旋酶的作用

B．丙过程用到的酶在高温下失活，因此在PCR扩增时需要再添加

C．如果把模板DNA的两条链用¹⁵N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，控制“94℃～55℃～72℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有¹⁵N标记的DNA占25%

D．PCR中由碱基错配引起的变异属于基因突变

回答下列有关基因工程和克隆技术的问题。（10分）

2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

63、说出绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中用到了哪些生物工程技术？           　

利用了哪些原理？                      （本题答案从下列所给选项中选择填写）

①转基因技术；②细胞核移植技术；③胚胎移植技术；④干细胞技术；⑤动物细胞培养技术

⑥基因突变；⑦基因重组；⑧动物细胞核具有全能性；⑨动物细胞具有全能性

64、过程①②中必需用到的酶分别是                和                 。绿色荧光蛋白基因之所以能与质粒重组，原因是                                               。

65、早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及               等物质。

通过上图中过程①的方法获取目的基因的数量是有限的，要获得大量的绿色荧光蛋白基因可以利用PCR技术。PCR扩增反应（如下图所示）中加入的TaqDNA聚合酶能在接近沸点的条件下，发挥延伸DNA子链的作用，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。请回答：

 

PCR（DNA聚合酶链式反应）技术示意图：

	PCR（DNA聚合酶链式反应）技术示意图

 

66、你认为TaqDNA聚合酶一定是从下列哪种生物体细胞中分离提取的？        

A．水母细胞         B．猪胎儿成纤维细胞   　C．极端嗜热菌     D．大肠杆菌

67、下面的表达式不能反映TaqDNA聚合酶的功能，为什么？                           。

 

68、用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点和标出碱基对数。（2分）

应用基因工程技术可以获得人们需要的生物新品种或新产品。请根据资料和图解回答下列问题：
材料一：蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，可制成防弹背心、降落伞绳等。蜘蛛丝还可被制成人造韧带和人造肌腱。科学家研究出集中生产蜘蛛丝的方法——培育转基因蜘蛛羊。
材料二：注射疫苗往往会在儿童和部分成年人身上引起痛苦，将疫苗藏身于水果蔬菜中，人们在食用这些转基因植物的同时也获得免疫力，因而无需免疫接种，这一新概念将引起疫苗研究的一场革命。

（1）过程①⑤所需要的工具酶有                   ，构建的乙肝表面抗原蛋白基因表达载体一般由                                  等部分组成。
（2）过程②是将重组质粒导入山羊受体细胞，受体细胞应选择          ，采用最多的也是最有效的导入方法是           ；
过程⑥是将重组质粒导入莴苣受体细胞，受体细胞可为                 ，采用最多的导入方法是                 。
（3）通过①～④过程培育的蜘蛛羊可以作为乳腺生物反应器，从         中提取所需要的蜘蛛丝蛋白。还可以形成膀胱生物反应器，从         中提取所需蛛丝蛋白，简化提取过程。
资料三：PCR技术（聚合酶链式反应）是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示合成过程，请据图分析回答：

（4）A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理叙述正确的是:(    )

A．该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键；

B．该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键；

C．该过程不需要解旋酶的作用；

D．该过程与人体细胞的过程完全相同；

（5）从图中可知，催化C过程的酶是  　         ，它与正常细胞内的酶区别是 　    ；PCR反应除提供酶、DNA模板、通过控制温度使DNA复制在体外反复进行外，还需要满足的两个基本条件是                        。
（6）如果把模板DNA的两条链用¹⁵N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，控制“94℃-55℃-72℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有¹⁵N标记的DNA占     。如果模板DNA分子共有a个碱基对，其中含有胞嘧啶m个，则该DNA复制10次，需要加入胸腺嘧啶脱氧核苷酸                  个。

应用基因工程技术可以获得人们需要的生物新品种或新产品。请根据资料和图解回答下列问题：

材料一：蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，可制成防弹背心、降落伞绳等。蜘蛛丝还可被制成人造韧带和人造肌腱。科学家研究出集中生产蜘蛛丝的方法——培育转基因蜘蛛羊。

材料二：注射疫苗往往会在儿童和部分成年人身上引起痛苦，将疫苗藏身于水果蔬菜中，人们在食用这些转基因植物的同时也获得免疫力，因而无需免疫接种，这一新概念将引起疫苗研究的一场革命。

（1）过程①⑤所需要的工具酶有                    ，构建的乙肝表面抗原蛋白基因表达载体一般由                                   等部分组成。

（2）过程②是将重组质粒导入山羊受体细胞，受体细胞应选择           ，采用最多的也是最有效的导入方法是            ；

     过程⑥是将重组质粒导入莴苣受体细胞，受体细胞可为                  ，采用最多的导入方法是                  。

（3）通过①～④过程培育的蜘蛛羊可以作为乳腺生物反应器，从          中提取所需要的蜘蛛丝蛋白。还可以形成膀胱生物反应器，从          中提取所需蛛丝蛋白，简化提取过程。

资料三：PCR技术（聚合酶链式反应）是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示合成过程，请据图分析回答：

（4）A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理叙述正确的是:(    )

A．该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键；

B．该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键；

C．该过程不需要解旋酶的作用；

D．该过程与人体细胞的过程完全相同；

（5）从图中可知，催化C过程的酶是   　          ，它与正常细胞内的酶区别是  　     ；PCR反应除提供酶、DNA模板、通过控制温度使DNA复制在体外反复进行外，还需要满足的两个基本条件是                         。

（6）如果把模板DNA的两条链用¹⁵N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，控制“94℃-55℃-72℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有¹⁵N标记的DNA占      。如果模板DNA分子共有a个碱基对，其中含有胞嘧啶m个，则该DNA复制10次，需要加入胸腺嘧啶脱氧核苷酸                   个。