请分析回答下列有关基因工程问题：

Ι 基因工程是按人们预先设计的蓝图，将目的基因通过一定方法导入到另一种生物的细胞中，使之产生符合人类需要的新的遗传性状或创造出新的生物类型的现代技术。

57.基因工程常用的三种工具为限制性内切酶、　　　　　　 、质粒，通常选择质粒作为“目的基因的运输载体”是由于　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

58.基因工程一般包括四步：获取目的基因；目的基因与运载体重组；　　　　　　　 ；

　　　　　　　　　 　　。

Ⅱ 在基因工程中通常需要利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR如右图示，包括三个基本反应步骤：①模板DNA的变性：模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后双链解离；②模板DNA与引 物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，合成一条新的与模板DNA 链互补的脱氧核苷酸链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得较多的目的基因。

59.温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物时所遵循的原则是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

60.在PCR技术中，引物的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

61.从理论上推测，第三轮循环产物中含有引物B的DNA片段所占比例为　　　　　　　　 。

62.下图表示利用PCR技术获取目的基因X的第一次循环产物。则至少需要在　　　 轮循环产物中才能开始出现独立且完整的的X基因。如果经过n次循环，则产物中①所示DNA分子数为　　　　　　 。

63.用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点。

请回答下列（1）、（2）小题。
（1）已知放线菌素D是RNA合成抑制剂。右图是根据海胆受精卵在有放线菌素D和无放线菌素D存在情况下培养时，对¹⁴C标记的缬氨酸参与蛋白质合成的实验结果绘制的曲线图。请据图回答有关问题：

①直接参与将¹⁴C—缬氨酸掺入新合成蛋白质的细胞器是          ，该过程在生物学上
称为         ，所依赖的模板是         分子，合成该分子所需要的原料是                   。
②从受精开始到10小时之内，蛋白质合成所依赖的模板分子的来源是       。（从下图四个选项中选择，用字母代表）

A．未受精卵原有的

B．受精卵新合成的

C．精子提供的

D．无法确定

③受精10小时以后，海胆细胞内新合成蛋白质所依赖的模板主要是     （答案从上小题四个选项中选择，用字母代表），作出此判断的依据是
                                                                  。
（2）鸡的输卵管细胞合成卵清蛋白，成红细胞合成β珠蛋白，胰岛细胞合成胰岛素，这些细胞都是在个体发育过程中逐渐产生的，因此早期人们推测细胞的这种分化是由于在发育过程中遗传物质的选择性丢失所致。分子生物学技术发展起来后，科学工作者用编码上述三种蛋白的基因分别作探针，对三种细胞中提取的总DNA的限制性内切酶的酶切片段和三种细胞的总RNA分别作分子杂交实验，结果如下表：

	细胞总DNA	细胞总RNA
	输卵细胞成红细胞胰岛细胞	输卵管细胞成红细胞胰岛细胞
卵清蛋白基因	+    +     +	+   －    －
β珠蛋白基因	+    +     +	－    +    －
胰岛素基因	+    +     +	－   －     +

      注：“+”阳性结果（表示杂交过程中有杂合双链）
“－”阴性结果（表示杂交过程中有游离的单链）
①上述实验结果说明：早期人们认为细胞的分化是由于在发育过程中遗传物质的选择性丢失所致，据此实验，你认为这种推测         （填“成立”或“不成立”），理由是          
                                                     。而细胞发育的不同阶段合成不同的蛋白质是                　　　　　　　　      的结果。同一生物不同类型的细胞具有不同的形态结构，各自执行特定的生理功能，其直接原因主要是由                   分子决定的，可以说这类分子是一切生命活动的体现者。
②卵清蛋白中富含人体所需的多种必需氨基酸。为开辟的食物来源，除了从日常禽蛋类食物中获取，还有望通过生物工程中的          和            利用大肠杆菌或酵母菌生产大量的卵清蛋白。

请回答下列（1）、（2）小题。

（1）已知放线菌素D是RNA合成抑制剂。右图是根据海胆受精卵在有放线菌素D和无放线菌素D存在情况下培养时，对¹⁴C标记的缬氨酸参与蛋白质合成的实验结果绘制的曲线图。请据图回答有关问题：

①直接参与将¹⁴C—缬氨酸掺入新合成蛋白质的细胞器是           ，该过程在生物学上

称为          ，所依赖的模板是          分子，合成该分子所需要的原料是                    。

②从受精开始到10小时之内，蛋白质合成所依赖的模板分子的来源是        。（从下图四个选项中选择，用字母代表）

A．未受精卵原有的     B．受精卵新合成的   C．精子提供的 D．无法确定

③受精10小时以后，海胆细胞内新合成蛋白质所依赖的模板主要是      （答案从上小题四个选项中选择，用字母代表），作出此判断的依据是

                                                                   。

（2）鸡的输卵管细胞合成卵清蛋白，成红细胞合成β珠蛋白，胰岛细胞合成胰岛素，这些细胞都是在个体发育过程中逐渐产生的，因此早期人们推测细胞的这种分化是由于在发育过程中遗传物质的选择性丢失所致。分子生物学技术发展起来后，科学工作者用编码上述三种蛋白的基因分别作探针，对三种细胞中提取的总DNA的限制性内切酶的酶切片段和三种细胞的总RNA分别作分子杂交实验，结果如下表：

	细胞总DNA	细胞总RNA
	输卵细胞 成红细胞 胰岛细胞	输卵管细胞 成红细胞 胰岛细胞
卵清蛋白基因	+    +     +	+    －     －
β珠蛋白基因	+    +     +	－    +     －
胰岛素基因	+    +     +	－    －     +

       注：“+”阳性结果（表示杂交过程中有杂合双链）

       “－”阴性结果（表示杂交过程中有游离的单链）

①上述实验结果说明：早期人们认为细胞的分化是由于在发育过程中遗传物质的选择性丢失所致，据此实验，你认为这种推测          （填“成立”或“不成立”），理由是          

                                                      。而细胞发育的不同阶段合成不同的蛋白质是                 　　　　　　　　       的结果。同一生物不同类型的细胞具有不同的形态结构，各自执行特定的生理功能，其直接原因主要是由                    分子决定的，可以说这类分子是一切生命活动的体现者。

②卵清蛋白中富含人体所需的多种必需氨基酸。为开辟的食物来源，除了从日常禽蛋类食物中获取，还有望通过生物工程中的           和             利用大肠杆菌或酵母菌生产大量的卵清蛋白。

 

请回答下列（1）、（2）小题。

（1）已知放线菌素D是RNA合成抑制剂。右图是根据海胆受精卵在有放线菌素D和无放线菌素D存在情况下培养时，对¹⁴C标记的缬氨酸参与蛋白质合成的实验结果绘制的曲线图。请据图回答有关问题：

①直接参与将¹⁴C—缬氨酸掺入新合成蛋白质的细胞器是           ，该过程在生物学上

称为          ，所依赖的模板是          分子，合成该分子所需要的原料是                    。

②从受精开始到10小时之内，蛋白质合成所依赖的模板分子的来源是        。（从下图四个选项中选择，用字母代表）

A．未受精卵原有的     B．受精卵新合成的   C．精子提供的 D．无法确定

③受精10小时以后，海胆细胞内新合成蛋白质所依赖的模板主要是      （答案从上小题四个选项中选择，用字母代表），作出此判断的依据是

                                                                   。

（2）鸡的输卵管细胞合成卵清蛋白，成红细胞合成β珠蛋白，胰岛细胞合成胰岛素，这些细胞都是在个体发育过程中逐渐产生的，因此早期人们推测细胞的这种分化是由于在发育过程中遗传物质的选择性丢失所致。分子生物学技术发展起来后，科学工作者用编码上述三种蛋白的基因分别作探针，对三种细胞中提取的总DNA的限制性内切酶的酶切片段和三种细胞的总RNA分别作分子杂交实验，结果如下表：

	细胞总DNA	细胞总RNA
	输卵细胞 成红细胞 胰岛细胞	输卵管细胞 成红细胞 胰岛细胞
卵清蛋白基因	+    +     +	+    －     －
β珠蛋白基因	+    +     +	－    +     －
胰岛素基因	+    +     +	－    －     +

       注：“+”阳性结果（表示杂交过程中有杂合双链）

       “－”阴性结果（表示杂交过程中有游离的单链）

①上述实验结果说明：早期人们认为细胞的分化是由于在发育过程中遗传物质的选择性丢失所致，据此实验，你认为这种推测          （填“成立”或“不成立”），理由是          

                                                      。而细胞发育的不同阶段合成不同的蛋白质是                 　　　　　　　　       的结果。同一生物不同类型的细胞具有不同的形态结构，各自执行特定的生理功能，其直接原因主要是由                    分子决定的，可以说这类分子是一切生命活动的体现者。

②卵清蛋白中富含人体所需的多种必需氨基酸。为开辟的食物来源，除了从日常禽蛋类食物中获取，还有望通过生物工程中的           和             利用大肠杆菌或酵母菌生产大量的卵清蛋白。

人的血清白蛋白(HSA)在临床上需求量很大，通常从人血中提取。但由于艾滋病病毒(HIV)等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。如果应用基因工程和克隆技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就成为可能。其大致过程如下：

　 Ⅰ.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精液，通过体外受精，形成奶牛受精卵；

　 Ⅱ.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵，形成重组细胞；

　 Ⅲ.电脉冲刺激重组细胞，促使其形成早期胚胎；

　 Ⅳ.将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

　 请回答下列问题：

　 (1)一般情况下，良种奶牛所产生的能用于体外受精的卵母细胞往往数量不足，请举出一种可以获得更多卵母细胞的方法：________________________________________________________________________。

　 (2)步骤Ⅰ中，在体外受精前，需要对奶牛的精子进行________处理。受精时，往往一个卵母细胞只能和一个精子结合，受精过程中防止多精入卵的生理反应包括________反应和卵黄膜封闭作用。

　 (3)步骤Ⅱ中，将人的血清白蛋白基因导入奶牛受精卵最为有效的方法是________。导入基因前，需要将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这一步骤属于基因工程“四步曲”中的__________________，此步骤的目的是____________________________________________，其中将血清白蛋白基因与调控组件结合时必须用到限制性核酸内切酶和________酶。

　 (4)实验步骤Ⅲ中，进行动物早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐和有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加________和动物血清。

　 (5)实验步骤Ⅳ中，应选择性别为________的奶牛胚胎进行移植。请举出一种人工控制或筛选胚胎性别的方法：____________________。　

　 (6)若需迅速得到大量转基因奶牛，现有两种处理方法：

　 方法A：在步骤Ⅳ中将早期胚胎分离成若干个胚胎细胞，让其分别发育成一头小牛。进行上述操作时，应选择发育至________阶段的胚胎进行操作，分割时必须注意要将早期胚胎中的________均等分割。

　 方法B：在步骤Ⅳ中将早期胚胎细胞的细胞核移植到普通黄牛的________细胞中，使其重组并发育成新胚胎。为获得大量可供移植的胚胎细胞核，可将早期胚胎细胞分离出来，在添加了抑制因子的培养液中，将其培养成能够增殖而不发生分化的________细胞，再从该细胞中提取所需的细胞核。

　 上述两种方法中，最能保持步骤Ⅳ中早期胚胎细胞遗传特征的是方法________。