（16分）Ⅰ.（8分）土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌，它带有一个大的质粒叫Ti质粒，它是携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。结构及转化过程如图所示，回答相关问题：

（1）为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即祛除瘤基因，将抗旱基因转移至________，然后在一定条件下将外植体在含土壤农杆菌的稀释培养基上培养，此时修饰的T—DNA转入植物细胞并整合到植物基因组中。以上过程需要的工具有                                          。

（2）将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选，发生转化的外植体开始增殖，形成________      ，通过产生不定芽再长出整个植物。

（3）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，可以直接在________水平对转基因植物与非转基因植物进行比较。

Ⅱ．（8分）请回答基因工程方面的有关问题：

(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如图所示）。

（1）图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。

①从理论上推测，第四轮循环产物中不含有引物B的DNA片段所占的比例为      。

②在第    轮循环产物中首次出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

（2）PCR反应体系中含有的DNA聚合酶具有           特点，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为                   。

（8分）土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌，它带有一个大的质粒叫Ti质粒(含冠瘿瘤基因)，它携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。结构及转化过程如图所示，回答相关问题：

（1）若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即­­­­­­­    ▲   ，将抗旱基因转移至Ti质粒的­­­­­­­    ▲   中，且要保证复制起始位点和
    ▲   不被破坏。然后在一定条件下将外植体在含有    ▲   的土壤农杆菌的稀释培养基上培养，使得抗旱基因转入植物细胞并整合到植物基因组中。
（2）将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选，发生转化的外植体通过   ▲   形成愈伤组织，再通过­­­­­­­    ▲   产生不定芽和体细胞胚再长出整个植物。
（3）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，如果培育成的植株能适应干旱环境，还应进行  ▲   水平鉴定，以确定该变异能否遗传给后代。为获得纯合的转基因植株，还需要对转基因植株进行严格的­­­­­­­    ▲   。

（13分）土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌，它带有一个大的质粒叫Ti质粒，它是携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。结构及转化过程如图所示，回答相关问题：


（1）从细胞结构的特点与复杂程度看，土壤农杆菌属于　    　　细胞，其质粒是能够自主          的环状          分子，Ti质粒作为转基因技术的基因表达载体，除了标记基因和目的基因外，还必须具有______________、______________。
（2）为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即祛除瘤基因，将抗旱基因转移至       ，然后在一定条件下将外植体在含       的稀释培养基上培养，此时修饰的T—DNA转入植物细胞并整合到植物基因组中。
（3）将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选，该培养基从功能上看应属于_________培养基，发生转化的外植体开始增殖，经       
过程形成愈伤组织，再通过_________________过程产生不定芽和体细胞胚，最终长出整个植物。
（4）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，在性状水平上鉴定的方法是____________________________________________________________________。在蛋白质水平进行检测的方法是从转基因植株提取蛋白质，进行           ，判断是否产生杂交带。
（5）为获得纯合的转基因植株，还需要对转基因植株进行严格的          。

（8分）土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌，它带有一个大的质粒叫Ti质粒(含冠瘿瘤基因)，它携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。结构及转化过程如图所示，回答相关问题：

（1）若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即­­­­­­­    ▲    ，将抗旱基因转移至Ti质粒的­­­­­­­    ▲    中，且要保证复制起始位点和

    ▲    不被破坏。然后在一定条件下将外植体在含有    ▲    的土壤农杆菌的稀释培养基上培养，使得抗旱基因转入植物细胞并整合到植物基因组中。

（2）将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选，发生转化的外植体通过   ▲    形成愈伤组织，再通过­­­­­­­    ▲    产生不定芽和体细胞胚再长出整个植物。

（3）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，如果培育成的植株能适应干旱环境，还应进行  ▲    水平鉴定，以确定该变异能否遗传给后代。为获得纯合的转基因植株，还需要对转基因植株进行严格的­­­­­­­    ▲    。

（5分）土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌，它带有Ti质粒。Ti质粒是携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段，其上只有T—DNA片段才能转入植物细胞的基因组。Ti质粒的结构及转化过程如图所示，请分析并回答：

（1）为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即去除瘤基因，将抗旱基因转移至       片段，然后在一定条件下将外植体在含土壤农杆菌的稀释培养基上培养，此时修饰的T—DNA转入植物细胞并整合到植物基因组中。以上过程需要的工具酶有              。

（2）将上述外植体置于一个含有         的选择培养基中进行筛选，发生转化的外植体开始增殖，形成            后，通过产生不定芽再长出整个植物。

（3）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，可以直接在个体水平对上述转基因植物与非转基因植物的           性能进行比较。