（09湛江市一模）(生物技术实践  10分)   

生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：

纤维素酶解  酵母发酵  蒸馏  成品。

（1）纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤取样--选择培养--梯度稀释--鉴别培养。

①最好选择怎样的环境采集土样？

②以下是一种培养基配方：纤维素粉5g、NaN0₃ 1g、Na₂HP0₄?7H₂0  1．2g、KH₂P0₄O．9g、 MgS0₄?7H₂0 O．5g、  KCl 0．5g、酵母膏0．5g、水解酵素0．5g(蒸馏水定容到1．000mL)。

该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是             。

③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入      染液，将筛选获得的菌液稀释后用       法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生          的菌落作为菌种进行扩大培养。

④纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢？可设计实验进行检测，请写出实验思路：                   。  

（2）进行工业化酶解时，为了使纤维素酶能反复使用，可以采用       技术。

（3）乙醇是酵母菌的发酵产物。发酵时酵母菌直接利用的物质是        。

（4）发酵时乙醇浓度升高会对酵母菌产生毒性，从而影响进一步的发酵。科学家利用基因工程方法创造出一种对乙醇浓度有高耐受力的酵母菌新菌种，该过程需采用PCR技术扩增目的基因。与体内DNA复制相比，PCR反应体系除需加入两种引物外，还需加入        。  

【生物——选修模块1：生物技术实践】（15分）
家蝇体内存在一种具有极强抗菌能力的抗菌蛋白，请回答下列有关分离和提取抗菌蛋白的问题：
（1）分离该抗菌蛋白可用                法，其原理是根据蛋白质分子的带电性质差异、大小及形状不同，                         不同而实现分离。
（2）蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、              、            、和                           。
（3）可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白质的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛乳膏和蛋白胨主要为细菌生长提供              和                 。
（4）分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液，培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的___________，确定该蛋白质的抗菌效果。
（5）抗菌培养常用的接种方法有___________和_____________。实验结束后，对使用过的培养基应进行             处理。

【生物——选修模块1：生物技术实践】（15分）

家蝇体内存在一种具有极强抗菌能力的抗菌蛋白，请回答下列有关分离和提取抗菌蛋白的问题：

（1）分离该抗菌蛋白可用                 法，其原理是根据蛋白质分子的带电性质差异、大小及形状不同，                          不同而实现分离。

（2）蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、               、             、和                            。

（3）可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白质的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛乳膏和蛋白胨主要为细菌生长提供               和                  。

（4）分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液，培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的___________，确定该蛋白质的抗菌效果。

（5）抗菌培养常用的接种方法有___________和_____________。实验结束后，对使用过的培养基应进行              处理。

（09韶关市调研）(生物技术实践，10分)

生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→成品。

（1）纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

①最好选择怎样的环境采集土样？_________________________________。

②以下是一种培养基配方：纤维素粉5 g、NaN0₃ 1g、Na₂HP0₄?7H₂0 1．2g、KH₂P0₄0．9 g、MgS0₄．7H₂O 0．5g、KCl 0．5g、酵母膏0．5 g、水解酪素O．5g(蒸馏水定容到1000mL)。该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是 ____________________________。

③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入______________染液，将筛选获得的菌液稀释后用______________方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生______________的菌落作为菌种进行扩大培养。

④纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢?请设计实验进行检测。____________________________________。

（2）进行工业化酶解时，为了使纤维素酶能反复使用，可以采用______________技术。

（3）乙醇是酵母菌的发酵产物。发酵时酵母菌直接利用的物质是______________。

（4）发酵时乙醇浓度升高会对酵母菌产生毒性，从而影响进一步的发酵。科学家利用基因工程方法创造出一种对乙醇浓度有高耐受力的酵母菌新菌种，该过程需采用PCR技术扩增目的基因。与体内DNA复制相比，PCR反应体系需加入哪两种特别的物质？_______________________________________________________。

.[生物——选1生物技术实践]

现在大力提倡无纸化办公，但是仍然不可避免的每年要产生大量的废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的资源——乙醇。右图是工业上利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工作流程，请回答相关问题：

（1）自然界中①环节需要的微生物大多分布在________________________的环境中。将从土壤中获得的微生物培养在以________________________为碳源、并加入_____________的培养基上筛选周围有________________________的菌落。

（2）如上所述的筛选中获得了三个菌落，对它们分别培养，并完成环节②，且三种等量酶液中酶蛋白浓度相同，则你认为三种酶液的活性________________________（一定相同、不一定相同、一定不同），可以通过________________________进行定量测定。

（3）根据测定结果，①环节常选择木霉，则②中获得的酶是________________________酶。该酶至少包括________________________三个组分。

（4）生产中可以满足④环节的常见菌种是________________________，为了确保获得产物乙醇，⑤环节要注意___________________，④过程要注意避免_________________。

（5）该技术虽然有广阔的前景，但存在酶的成本高等问题，为了降低成本主要从以下几方面入用改进该过程。首先要通过________________________等技术手段对产酶微生物改造，提高酶的产量。其次，可利用________________________等技术使酶能够重复利用。