（14分）生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。

（1）用于生产生物柴油的植物油不易发挥，宜选用____  _、____  _方法从油料作物中提取。
（2）筛选产脂肪酶的微生物M的固体培养基的组成成分有KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是         ，氮源是      ，另外还应加入            作为碳源。
（3）测定培养液中微生物数量，可选用_____法直接计数；为降低生物柴油生产技术，可利用______技术使脂肪酶能够重复使用。

生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M（单细胞）产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图1）。

1、筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供             ，培养基灭菌采用的最适方法是                法。

2、图2是采用纯化微生物M培养的两种接种方法接种后培养的效果图。则获得图A效果的接种方法是           ，图B效果的接种方法是             。

3、若需人工大量克隆脂肪酶基因，可应用___         _技术，该过程需要的特殊酶是             。

4、常用血球计数板（规格为1mm×1mm×0.1mm）分两类，一类是每个计数室包括16个中格，每个中格包括25个小格，这种计数板抽样计数时只要统计四个顶角的中格即可；另一类是是每个计数室包括25个中格，每个中格包括16个小格，这种计数板抽样计数时除了统计四个顶角的中格外还要计数中央的一个中格。在实验中如需定期测定培养液中微生物M的细胞数量，则在取出的样液中要立即加入固定液，其目的是              。如果将样液稀释100倍，采用血球计数板计数时，观察到的计数室中细胞分布如图2所示，则培养液中微生物M的 细胞密度为              个/L.

5、研究人员拟将某目的基因导入微生物M 细胞中，为此需要选择合适的质粒作为运载体。下图所示X－1、X－2、X－3、X－4为四种相关质粒，其中Tc^r表示抗四环素的抗性基因，Ap^r表示青霉素抗性基因，E1和E2表示两种限制酶的识别位点。基因工程中限制酶作用的化学键是                           。若将这四种质粒分别导入微生物M，然后将微生物M菌液分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上培养。则在这两种培养基上均不能生长的M细胞类型有________________。

6、已知Tc^r长度为1.5kb(1kb=1000个碱基对)，Ap^r长度为0.5kb。如果X－1用E1酶切，产生0.5kb碱基片段和8.5 kb碱基片段,那么质粒X－2用E2酶切后的片段长度为_____________对碱基

生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。 （每空2分）       

（1）用于生产生物柴油的植物油不易发挥，宜选用_________________、________________方法从油料作物中提取。
（2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中的添加的植物油为微生物生长提供__________，培养基灭菌采用的最适方法是______________法。
（3）测定培养液中微生物数量，可选用_____________法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测_______________，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产技术，可利用____________________技术使脂肪酶能够重复使用。
（4）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的___________________技术。

【生物—生物技术实践】

生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。

（1）用于生产生物柴油的植物油不易发挥，宜选用_____、_____方法从油料作物中提取。

（2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中的添加的植物油为微生物生长提供____，培养基灭菌采用的最适方法是____法。

（3）测定培养液中微生物数量，可选用_____法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测______，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产技术，可利用______技术使脂肪酶能够重复使用。

（4）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的_____技术。

【生物—生物技术实践】

生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。

（1）用于生产生物柴油的植物油不易发挥，宜选用_____、_____方法从油料作物中提取。

（2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中的添加的植物油为微生物生长提供____，培养基灭菌采用的最适方法是____法。

（3）测定培养液中微生物数量，可选用_____法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测______，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产技术，可利用______技术使脂肪酶能够重复使用。

（4）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的_____技术。