基因工程中，外源DNA片段常用PCR方法扩增，扩增后需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。下表列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）含目的基因的外源DNA片段用PCR方法扩增时使用DNA聚合酶，其不同于一般生

物体内DNA聚合酶的最主要特点是　 ▲　 。PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图1为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？　 ▲　 。

（2）图2中的质粒和含目的基因的外源DNA构建重组质粒，一般不只用AluⅠ一种酶切割，原因是　 ▲　 。

（3）图2中获取的重组质粒时运用了　 ▲　 限制酶切割，切割后的质粒与目的基因片段混合，加入了　 ▲　 酶，该酶是对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？　 ▲　 。

（4）重组质粒导入受体细胞后，通常要进行检测。若要检测目的基因是否转录出mRNA，可用　 ▲　 技术；若要检测目的基因是否表达出蛋白质，可用　 ▲　 技术。

回答下列有关基因工程的问题。
(1)基因工程中使用的限制酶，其特点是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Ap^r表示抗青霉素的抗性基因，Tc^r表示抗四环素的抗性基因。

(2)将两端用E1切开的Tc^r基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（可多选）

回答下列有关基因工程的问题。

(1)基因工程中使用的限制酶，其特点是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Ap^r表示抗青霉素的抗性基因，Tc^r表示抗四环素的抗性基因。

(2)将两端用E1切开的Tc^r基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（可多选）

A．X－1

B．X－2

C．X－3

D．X－4

(3)若将上图所示X－1、X－2、X－3、X－4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

(4)如果X－1用E1酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片段：那么质粒X－2（Tc^r基因的长度为1200对碱基）用E2酶切后的片段长度为＿＿＿＿＿＿＿＿＿对碱基。

(5)若将外源的Tc^r基因两端用E2切开，再与用E2切开的X－1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X－4的细胞数与含X－1的细胞数之比为13，增大DNA连接酶用量能否提高上述比值？＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

(8分)回答有关基因工程的问题：
(1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生______末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生______(相同、不同)黏性末端的限制酶。
(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是提供              特异性识别结合位点驱动基因转录。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用______处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为__        ___。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成___   ___，常用抗原—抗体杂交技术。
(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的　　中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的    _上。