1．团藻、大肠杆菌、HIV病毒都具有的是

A．细胞膜　　　 　　 B．染色体　　 　　 C．线粒体　 　　 D．核酸

(二)填空题：

11、把目的基因与质粒DNA缝合时，中间的碱基对靠　　　　　　　　 连接起来，而两链上的磷酸、脱氧核糖则在　　 的作用下连接起来。质粒是基因操作中经常用的　　　　　 。

12、基因工程又叫做　　　　　　　　　 技术或　　　　　　　　　 技术。这种技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工　　　　 　　　 和　　　　　　　　　 ，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。　　

13、治疗糖尿病用的胰岛素，在过去主要是从动物(如猪、牛)体获得的。自20世纪70年代基因工程发展起来以后，人们开始采用高新技术生产胰岛素，其操作过程如图1-5所示：

(1)图中的质粒存在于细菌细胞中，从其分子结构看，可确定它是一种　　　　　　 。

(2)请根据碱基互补配对的原则判断，在连接酶的作用下，甲与乙能否拼接起来，并说明理由。

(3)细菌丙进行分裂后，其中被拼接的质粒也由一个变成两个，两个变成四个……质粒的这种增加方式在遗传学上称为 　　　　　　　 。目的基因通过表达后，能使细菌产生胰岛素，这是因为基因具有控制　　　　　　　　　 合成的功能。

答案；

11、氢键　 DNA连接酶　 载体　 12、基因拼接　 DNA重组　 剪切　 拼接

13、DNA分子 　能　 二者具有相同的黏性末端　 DNA复制　 蛋白质

(一)选择题

1、关于限制酶的说法中，正确的是(　　 )

A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列

B、EcoRI切割的是G-A之间的氢键

C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA

D．限制酶只存在于原核生物中

2、DNA连接酶催化的反应是(　 )

A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键　　　　 B．黏性末端碱基之间形成氢键

C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接　　 D．A、B、C都不正确

分析C还可能有平末端

3、作为基因的运输工具--载体，必须具备的条件及理由是(　 )

A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因

B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达

C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件

D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选

4、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是(　 )

①能自主复制　　　 ②不能自主复制　　 ③结构很小　　 ④是蛋白质　　 ⑤是环状RNA　　　

⑥是环状DNA　　　 ⑦能“友好”地“借居”

A、①③⑤⑦　　 B、②④⑥　 　C．①③⑥⑦　　 D．②③⑥⑦

5、在受体细胞中能检测出目的基因是因为(　　 )

A、目的基因上有标记 　　　　　B、质粒具有某些标记基因

　　　 C、重组质粒能够复制　　 　　　　D．以上都不正确

6、关于质粒的叙述正确的是(　 )

A、质粒是能够自我复制的环状DNA分子　 B、质粒是唯一的载体

C、重组质粒是目的基因　　　　　　　　　 D、质粒可在宿主外单独复制

7、基因工程中可用作载体的是(　　 )

①质粒　　 ②噬菌体　　　 ③病毒　　 ④动物细胞核

A、①②③　　 B、①②④　　 C．②③④　　 D、①③④

8、下列关于基因工程中所选用的质粒的说法，错误的是(　 )

A、不能没有标记基因　　 　　　　 　　B、是小型链状的DNA分子

C、能够自我复制 　　　　　　　　　 　　D．可与目的基因重组

9、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是(　 )

A、①②　 　 　　B、①③　 　　C、①④　　 　D．②③

10、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是(　 )

(1)限制酶(2)连接酶(3)解旋酶(4)还原酶

A、(1)(2)(3)　　 B、(1)(2)(4)　 　C、(1)(2) 　　　D、(1)(3)

4、基因进入受体细胞的载体--“分子运输车”

(1)基因操作过程中使用载体两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。

(2)现在通常使用的载体是　　　　　　　　　　　　　 ，它是一种相对分子质量较小、独立于拟核DNA之外的环状DNA，有的细菌中有一个，有的细菌中有多个。

(3)质粒通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以　　　　　　 复制，也可整合细菌拟核DNA中，随着拟核DNA的复制而复制。

(4)其他载体还有　　　　　　　　　　　　　　　　 和　　　　　　　　　　　　　　　　 等。

(5)作为载体必须具备以下条件：

能够在宿主细胞中复制并稳定地保存，具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选，如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。

例3、以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，分析回答问题。

(1)其中①和　　　　　　　　 是由一种限制酶切割形成的　　　　　　　　　　 末端，两者要重组成一个DNA分子，所用DNA连接酶通常是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(2)　　　　　　　　 和　　　　　　　　　 是由另一种限制酶切割形成的　　　　　　　　　 末端，两者要形成重组DNA片段，所用DNA连接酶通常是　　　　　　　　　　　　　　　　 。　　

答案：③　 平　 T₄DNA连接酶　 ②　 ④　 黏性　 DNA连接酶

3、DNA连接酶--“分子缝合针”

根据DNA连接酶的来源不同，可以将它分为两类：

一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为DNA连接酶。DNA连接酶只能将　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　 　　　 连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。

另一类是从　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 分离出来的，称为T₄DNA连接酶。T₄DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的　　　　　　　　　　　　 ，又可以“缝合”双链DNA片段的　　　　　　　　　　　 ，但连接　　　　　　　　　　 之间的效率比较低。

例2、下图为DNA分子的切割和连接过程。

(1)EcoRI是一种　　　　　　　　　 酶，其识别序列是　　　　　　　　　　　　　　 ，切割位点是　　　　　　　　　　 与　　　　　　　　　 之间的　　 　　　　　　　 键。切割结果产生的DNA片段末端形式为　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(2)不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是　　　　　　　　　　　 连接酶，此酶的作用是在　　　　　　　　　 与　　　　　　　　　 之间形成　　　　　　　　　 键，而起“缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是　　　　　　　　　　　　　　 。

　 答案：限制酶　　 GAATTC　 鸟嘌呤脱氧核苷酸　 腺嘌吟脱氧核苷酸　 磷酸二酯键　 黏性末端　 DNA　 鸟嘌呤脱氧核苷酸　 腺嘌吟脱氧核苷酸　 磷酸二酯键 T₄DNA连接酶

2、限制性核酸内切酶

　　　 (1)切割DNA的工具是　　　　　　　　　　　　　　　 ，又称　　　　　　　　　　　　 。

　　　 (2)这类酶在生物体内能将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保持细胞原有的遗传信息。

　　　 (3)由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶(简称限制酶)。

　　　 (4)DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段，末端通常有两种形式，即　　　　　　 和　　　　　　　　　 。

　　　 例1、下列关于限制酶的说法正确的是(　　 )

A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少

B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列

C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端

D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键

1、基因工程的原理：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外　　　　　　　　　　　 和　　　　　　　　　　　　 ，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在　　　　　　　　　　　　 水平上进行设计和施工的，因此又叫做　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

2、教学难点

　　　 基因工程载体需要具备的条件

1、教学重点

　　　 DNA重组技术所需的三种基本工具的作用

2、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新