1、PCR技术

聚合酶链反应(PolymeraseChainReactionm,PCR)是一项体外基因扩增技术。

PCR技术的基本原理　类似于DNA的天然复制过程由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①　模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

②　模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的"半保留复制链"，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

(三)基因操作的基本步骤

进行基因操作一般要经历四个基本步骤，也就是基因操作的“四步曲”。

1. 提取目的基因：

主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；另一条是人工合成基因。

(1)“鸟枪法”：

　　 优点：

缺点：

(2)人工合成基因的方法：主要有两条途径。

反转录法：

根据已知的蛋白质的氨基酸序列合成目的基因：

2. 目的基因与运载体结合

3. 目的基因导入受体细胞

(1)方式：

转化

转导

转染

(2)一般受体细胞种类

4. 目的基因的检测和表达

检测

表达

17、(1)

①

②

③可以连接的，因为由两种限制性内切酶切割后所形成的黏性末端是相同的(或是可以互补的)

课时12　 基因工程简介(二)

16、(1)限制性内切酶 碱基互补配对(2)3／4 雌雄配子各有1／2含抗除草剂基因；受精时，雌雄配于随机结合 (3)叶绿体遗传表现为母系遗传，目的基因不会通过花粉传递丽在下一代中显现出来

17、(1)限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

答：

②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。

答：　　

③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？

答案：1-5 CADCB　 6-10ACABC　 11-15B、AD、ABD、ABC、BC

16、在植物基因工程中，用土壤农杆菌中的Ti质粒作为运载体．把目的基因重组人Ti质粒上的T-DNA片段中，再将重组的T-DNA插入植物细胞的染色体DNA中。

　(1)科学家在进行上述基因操作时，要用同一种　　　　　 　分别切割质粒和目的基因，质粒的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过　　　　　　　　 而黏合。

　(2)将携带抗除草剂基因的重组Ti质粒导入二倍体油菜细胞，经培养、筛选获得一株有抗除草剂特性的转基因植株。经分析，该植株含有一个携带目的基因的T-DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，在该转基因植株自交F1代中，仍具有抗除草剂特性的植株占总数的 　　　　　　　　，原因是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　(3)种植上述转基因油菜，它所携带的目的基因可以通过花粉传递给近缘物种，造成“基因污染”。如果把目的基因导人叶绿体DNA中，就可以避免“基因污染”，原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

15、(多选)下列关于基因工程的说法中，正确的是(　 )

A、基因工程经常以抗菌素抗性基因为目的基因

B、 细菌质粒是基因工程常用的运载体

C、 通常用一种限制性内切酶处理含目的基因DNA，用同一种处理运载体

D、为育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体

14、(多选) 下列关于运载体的概括中正确的是

A．　 运载体是核酸分子　　

B.在宿主细胞内可以独立复制

C．对宿主细胞的生理代谢不起决定作用

D．运载体主要分布在细胞膜上，其引导核酸分子进入细胞作用

13、(多选)下列关于基因工程的说法中，不正确的是(　 )

A、基因工程的设计和施工都是在细胞水平上进行的

B、 目前基因工程中所有的目的基因都是从供体细胞直接分离得到的

C、 基因工程能使科学家打破物种界限，定向改造生物性状

D、只要检测出受体细胞中含有目的基因，那么目的基因一定能成功进行表达

12、(多选)在遗传工程技术中，限制性内切酶主要用于(　　 )

A、目的基因的提取

B、目的基因的导入

C、目的基因的检测

D、目的基因与运载体的结合