5、对抗虫棉的修饰：因检测发现目的基因已经被导入，但不能表达，也没有表达出什么，因此推测修饰的部分可能是非编码区部分的调控序列而不是编码区部分

课时12跟踪训练

4、目的基因的检测和表达中所使用的大肠杆菌有几种，有具有抗青霉素的，用以获取质粒，有不具有抗青霉素的用以导入质粒的、而在培养这种大肠杆菌时又不能加入青霉素否则这种不具有抗青霉素大肠杆菌将将死亡。但在检测时却是要加入青霉素以淘汰没有被导入含抗性的大肠杆菌。

3、针对书上提到的青霉菌涉及的相关知识：①青霉菌新陈代谢的基本类型是什么？②青霉菌是原核生物还是真核生物？③青霉菌高产菌株用何原理获得？④青霉菌产生的青霉素作用在细菌的什么结构上？⑤发酵工程生产青霉素过程中有些杂菌会产生什么酶可将青霉素分解？⑥通过什么工程可以改造青霉素的分子结构从而形成新型青霉素，以对付细菌不断增强的抗药性？

2、目的基因与载体结合的结果有三种情况：目的基因与目的基因结合；质粒与质粒结合；目的基因与质粒结合

1、PCR技术

聚合酶链反应(PolymeraseChainReactionm,PCR)是一项体外基因扩增技术。

PCR技术的基本原理　类似于DNA的天然复制过程由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①　模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

②　模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的"半保留复制链"，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

(三)基因操作的基本步骤

进行基因操作一般要经历四个基本步骤，也就是基因操作的“四步曲”。

1. 提取目的基因：

主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；另一条是人工合成基因。

(1)“鸟枪法”：

　　 优点：

缺点：

(2)人工合成基因的方法：主要有两条途径。

反转录法：

根据已知的蛋白质的氨基酸序列合成目的基因：

2. 目的基因与运载体结合

3. 目的基因导入受体细胞

(1)方式：

转化

转导

转染

(2)一般受体细胞种类

4. 目的基因的检测和表达

检测

表达

17、(1)

①

②

③可以连接的，因为由两种限制性内切酶切割后所形成的黏性末端是相同的(或是可以互补的)

课时12　 基因工程简介(二)

16、(1)限制性内切酶 碱基互补配对(2)3／4 雌雄配子各有1／2含抗除草剂基因；受精时，雌雄配于随机结合 (3)叶绿体遗传表现为母系遗传，目的基因不会通过花粉传递丽在下一代中显现出来

17、(1)限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

答：

②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。

答：　　

③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？

答案：1-5 CADCB　 6-10ACABC　 11-15B、AD、ABD、ABC、BC

16、在植物基因工程中，用土壤农杆菌中的Ti质粒作为运载体．把目的基因重组人Ti质粒上的T-DNA片段中，再将重组的T-DNA插入植物细胞的染色体DNA中。

　(1)科学家在进行上述基因操作时，要用同一种　　　　　 　分别切割质粒和目的基因，质粒的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过　　　　　　　　 而黏合。

　(2)将携带抗除草剂基因的重组Ti质粒导入二倍体油菜细胞，经培养、筛选获得一株有抗除草剂特性的转基因植株。经分析，该植株含有一个携带目的基因的T-DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，在该转基因植株自交F1代中，仍具有抗除草剂特性的植株占总数的 　　　　　　　　，原因是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　(3)种植上述转基因油菜，它所携带的目的基因可以通过花粉传递给近缘物种，造成“基因污染”。如果把目的基因导人叶绿体DNA中，就可以避免“基因污染”，原因是