8．(2010年海南模拟)红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O₂或CO₂，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题：

(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：________、________、________和________。

(2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。

①加入柠檬酸钠的目的是________________________________。

②在样品处理中包括红细胞的洗涤、________、分离血红蛋白溶液、透析。

③洗涤红细胞的目的是________，你如何知道红细胞已洗涤干净？______________________________。

④分离红细胞时对离心速度和离心时间的要求是__________________。

⑤若离心速度过高和时间过长结果会怎样？_________________。

(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析，这就是样品的粗分离。

①透析的目的是_________________________________________。

②透析的原理是_____________________________________。

(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS­聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。

①样品纯化的目的是_____________________________________。

②血红蛋白有什么特点？_______________________________。

这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？_________________

____________________________________________。

解析：分离提取血红蛋白的实验流程大致是样品处理-粗分离-纯化-纯度鉴定四个步骤。柠檬酸钠属于抗凝剂。血红蛋白是红色含铁的蛋白质。凝胶色谱法分离蛋白质是依据蛋白质的相对分子质量大小来进行的。

答案：(1)样品处理　粗分离　纯化　纯度鉴定　(2)①防止血液凝固　②血红蛋白的释放　③去除杂蛋白　离心后的上清液没有黄色　④低速短时间离心，如500 r/min离心2 min　⑤离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度　(3)①去除相对分子量较小的杂质　②透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内　(4)①通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂蛋白除去　②血红蛋白呈现红色　在凝胶色谱分离时可通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液，这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。

7.关于DNA的粗提取和物理性质的观察实验：

(1)在实验前，取0.1 g/mL的________溶液置于烧杯中，注入新鲜鸡血并同时用玻璃棒搅拌。静置一天________即自行沉淀，除去上清液，即得到实验所需材料。

(2)第一次加蒸馏水的目的是_____________________________。

(3)将提取得到的丝状物置于载玻片上，加____________溶液，丝状物被染成____________色，证明此丝状物的主要成分为DNA。

答案：(1)柠檬酸钠　鸡血细胞

(2)使血细胞加速破裂

(3)甲基绿　蓝绿色

6．以下对DNA和血红蛋白的提取与分离(鉴定)实验的分析正确的是(　)

A．都要用猪血细胞来进行实验

B．在DNA的粗提取与鉴定实验中，有两次DNA析出，所用的方法相同

C．在实验中都要进行除杂处理以便得到较纯净的DNA或血红蛋白

D．将析出的DNA溶解在2 mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺后呈现蓝色

答案：C

5．下列操作过程的叙述中错误的是(　)

A．PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌

B．PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20 ℃储存

C．PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后，迅速融化

D．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换

答案：C

4．(2010年苏州模拟)以下关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述正确的是(　)

A．红细胞洗涤过程中要加入5倍体积的蒸馏水，重复洗涤3次

B．将血红蛋白溶液放在质量分数为0.9%的NaCl溶液中透析12小时

C．凝胶装填在色谱柱内要均匀，不能有气泡存在

D．蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的移动速度慢

解析：选C。红细胞洗涤过程中要加入5倍体积的生理盐水，重复洗涤3次目的是除去杂蛋白。透析时使用物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液，而不是用0.9%的NaCl溶液。蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的在凝胶外部移动，移动速度快。在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。

3．关于DNA的复制，下列叙述正确的是(　)

A．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链

B．DNA复制不需要引物

C．引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合

D．DNA的合成方向总是从子链的3′端向5′端延伸

解析：选C。由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3′端开始即复制方向由3′端向5′端延伸。由于DNA分子是反向平行的，子链是依据碱基互补配对原则，在DNA聚合酶作用下合成的，其合成是从子链5′端向3′端延伸。

2．(2008年高考江苏卷)下列叙述中错误的是(　)

A．改变NaCl溶液的浓度只能使DNA溶解而不能使其析出

B．在沸水浴中，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色

C．用电泳法可分离带电性质、分子大小和形状不同的蛋白质

D．用透析法可去除蛋白质样品中的小分子物质

解析：选A。本题考查生物技术的应用。DNA在NaCl溶液中的溶解度是随着NaCl浓度的变化而变化。在0.14 mol/L NaCl溶液中DNA的溶解度最小，低于或高于0.14 mol/L，DNA的溶解度都会增大。在DNA粗提取实验中就是先把核物质溶解在2 mol/L NaCl溶液中，然后逐渐加水，稀释至0.14 mol/L时，使DNA析出。

1．(2009年高考江苏卷)下列关于DNA和蛋白质提取与分离实验的叙述，正确的有(多选)(　)

A．提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞

B．用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质

C．蛋白质提取和分离过程中进行透析可以去除溶液中的DNA

D．蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化

解析：选BD。提取动物细胞中的DNA才要用蒸馏水涨破细胞，提取蛋白质要用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂；蛋白质提取和分离过程中进行透析可除去相对分子质量较小的杂质，而将大分子保留在袋内。故A、C项错误。

10．(2008年高考宁夏卷)根据从胡萝卜中提取胡萝卜素的相关知识及胡萝卜素的性质，回答下列问题。

(1)胡萝卜素是__________色结晶。从胡萝卜中提取胡萝卜素，常用__________作为溶剂，原因是____________________。

(2)从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是______法。用这种方法提取胡萝卜素的主要步骤是：粉碎、干燥、______、____________。

(3)在胡萝卜颗粒的加热干燥过程中，应严格将______和______控制在一定范围内，原因是__________________。

(4)提取的胡萝卜素可通过______法进行鉴定，在鉴定过程中需要用______对照。

(5)一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成______比。

解析：解答该题应先回忆胡萝卜素的物理性质、萃取过程及注意事项，再逐题回答。

(1)胡萝卜素为橘(橙)黄色结晶，是一种脂质物质，常用有机溶剂进行提取。

(2)(3)(5)提取胡萝卜素常用的方法为萃取法，其主要步骤包括粉碎、干燥、萃取、过滤、浓缩等。在干燥时要控制好温度和时间，因为温度过高和时间过长会导致胡萝卜素分解，干燥的目的是提高提取效率，因为提取效率与原料颗粒的含水量成反比。

(4)鉴定胡萝卜素可用纸层析法，在鉴定过程中需要用标准样品进行对照。

答案：(1)橘(橙)黄　亲脂性有机溶剂(或有机溶剂)

胡萝卜素是脂质物质

(2)萃取　萃取　过滤　浓缩

(3)温度　时间　温度过高和时间过长会导致胡萝卜素分解

(4)纸层析　标准样品　(5)反

9．如图为胡萝卜素粗品鉴定装置示意图，请据图回答下列问题。

(1)胡萝卜素粗品鉴定的方法名称是________。

(2)图中②的名称是________。

①的作用是______________________

_________________________________。

(3)⑤为________，对于⑤实验时应注意_________________。

(4)⑥为________，常用________。

(5)如果层析液没及⑤会导致_____________________________。

解析：胡萝卜素粗品的鉴定常用纸层析法，在该法中，需注意：(1)点样要快速细致并保持滤纸干燥；(2)要保持层析容器中有层析液的饱和蒸气，以保证层析效果；(3)层析液不可没及样品原点，以免色素溶解于层析液中，使鉴定失败。

答案：(1)纸层析法

(2)色谱容器　防止层析液挥发

(3)样品原点　点样应该快速细致并保持滤纸干燥

(4)溶剂　石油醚

(5)胡萝卜素溶解在层析液中，导致鉴定失败