19．(9分)某班同学用新鲜苹果榨取果汁并制作果酒，其简要流程如下：

新鲜苹果→清洗干净→去掉果核→榨汁机榨汁→果汁

从成品果酒中分离酵母菌→扩大培养→固定化酵母细胞

→发酵→果酒

(1)实验过程中，该小组同学发现榨取的果汁非常浑浊，解决的方法是____________________。

(2)分离酵母菌应使用__________培养基，固定化酵母细胞常采用__________法，若想使这些酵母细胞能反复使用，实验过程中一定要注意__________________。

(3)在酸性条件下，可用________________来检测发酵产物中是否有酒精产生。若想进一步检测所得果酒中酵母菌的密度，可采用__________________法。

(4)发酵完成后，该班同学制做的果酒品质非常好，为方便后续年级使用，可将菌液________________保存。

(5)另一个班的同学用葡萄制做的果酒酒味纯正，放置一段时间后，发现果酒带有明显的酸味，请分析出现酸味的原因　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

_____________________________________________________________________　　　 。

答案　 1．A　2．A　3．B　4．C　 5．B　6．C　7．C　8．D　9．AD　10．BD　

18．(11分)从自然界获得纯种酿酒酵母菌的基本程序是：配制培养基-接种-培养-观察记录-纯化培养。请回答下列有关问题：

(1)酵母菌的培养最好使用下列哪种培养基？________。

A．牛肉膏蛋白胨培养基

B．麦芽汁琼脂培养基

C．蛋白胨酵母膏培养基

D．MS培养基

(2)采用平板划线法接种时，开始接种时要灼烧接种环，目的是________________。要把接种后的培养基和一个未接种的培养基同时放入恒温箱培养，设置“未接种的培养基”做对照的目的是______________________。

(3)将得到的纯种酿酒酵母接种到葡萄汁中，经过发酵可以得到______________。

(4)将酵母菌破碎并提取得到酵母菌的蛋白质，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的________、____________。

(5)把从酵母细胞中提取的淀粉酶固定在尼龙布上制成固定化酶，采用的方法是__________，与传统酶应用技术相比，此技术最显著的优点是__________________________________________________。

17．(8分)尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用。分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

(1)根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？__________(能/不能)，原因是___________________________。

(2)要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用____________法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的____________就能大约推测出样品中活菌数。

(3)初步分离脲酶通常用________________法，如下图，试管中收集到的液体最先出现的是__________________________。鉴定分离出的脲酶纯化程度，一般采用__________法。

(4)该同学设想：由活性脲酶和尿素混合，制成“加酶尿素”，尿素肥效一定更高。为了提高“加酶尿素”中脲酶的利用率，应当采用　　　　　 技术。

16．(9分)近几年我国柑橘大丰收，提取橘皮精油是提高其经济价值的重要途径。请分析回答提取过程的有关问题：

(1)提取橘皮精油，常采用________________法而不用蒸馏法，原因是　　　　　　　　

________________________________________________________________________。

(2)提取橘皮精油时，为了提高出油率，首先将橘皮______________，并用石灰水浸泡，石灰水的作用是___________________________。

(3)压榨过程，为了使橘皮油易与水分离，常加入____________________________　　 。

(4)得到压榨液后，过滤除去固体物和残渣，然后______________进一步除去质量较小的残留固体物，再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮精油分离出来。此时，橘皮油中含有少量的水和果蜡，需________________________________使杂质沉淀，用吸管吸出上层澄清橘皮油，其余部分过滤，__________________混合合并后成为最终的橘皮精油。

15．(8分)生活中有许多微生物技术的应用，请分析回答：

(1)家庭酿酒时先将米煮熟，其目的是_________________________。冷却到30℃后才能加酒药的原因是______________________。如果时常开坛盖取酒，不久酒就会变酸，其原因是________________。

(2)腐乳制备过程中，豆腐相当于微生物生长的______，豆腐变为味道鲜美腐乳的原理是_______________________________________　　 ____________，写出制作腐乳的实验流程： ____________________________________________________________________。

(3)在制作泡菜过程中，主要起作用的微生物是______，欲检测泡菜中亚硝酸盐含量，使用对氨基苯磺酸溶液和____________________溶液检测，泡菜溶液会出现玫瑰红色。

14．(7分)现在大力提倡无纸化办公，但是每年仍然不可避免的产生了大量废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的资源--乙醇。下图是工业上利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工作流程，请回答相关问题：

(1)　　 从生物体内提取出来的酶，将其分离提纯的最简便易行的方法是　　　 技术，其原理

是根据蛋白质分子的　　　大小和所带　　　　　多少分离蛋白质。

(2)上述工作流程中①环节需要的微生物大多分布在　　　　　　 的环境中。可利用　　　　　　技术，使②中的酶能够重复利用。

(3)生产中可以满足④环节的常见菌种是　　，④过程要注意对接种器材进行　　　。为了确保⑤环节成功，后期要注意发酵装置　　　。

13．(9分)目前，加酶洗衣粉中的蛋白酶主要是中温蛋白酶，最适酶活温度在50℃左右，由于日常洗涤用水的温度达不到该温度，导致蛋白酶活性受到影响。适冷蛋白酶是从适冷鱼类体内分离纯化或由深海适冷菌分泌出的酶类，最适酶活温度在20℃左右，用其作为洗衣粉添加剂可在较低的温度下达到理想的洗涤效果。下图为分离可分泌蛋白酶的适冷菌的操作步骤，据图回答问题：

(1)在将配制好的牛肉膏蛋白胨培养基分装到三角瓶中时，为避免培养基沾到瓶口，必须使用______________进行分装，并及时进行____________操作。

(2)将扩大培养后的深海微生物用________________法接种到含酪蛋白的固体培养基表面，在适宜条件下培养一段时间，挑出形成透明圈的菌落，即为初选出的适冷菌。

(3)为进一步检测分离出的适冷菌分泌的适冷蛋白酶的最适酶活温度，将该菌按上图所示分7组进行培养，这7组实验间形成了______________，__________________组所对应的温度为最适酶活温度。

(4)由操作过程可知该适冷菌的代谢类型为__________________。

(5)若将分离到的适冷菌接种到一定容积的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于适宜条件下振荡培养，细菌数量将呈__________增长，其环境容纳量主要取决于________。

12．(8分)(2010·山东卷，34)生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化学燃料的消耗。科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油(如下图)。

(1)用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用　　、　　方法从油料作物中提取。

(2)筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供　　，培养基灭菌采用的最适方法是　　法。

(3)测定培养液中微生物数量，可选用　　法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测　　，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用　　技术使脂肪酶能够重复使用。

(4)若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的　　　 技术。

11．(7分)(2010·全国高考Ⅰ，34)下列是与微生物培养有关的问题，请回答：

(1)某细菌固体培养基的组成成分是KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是________，碳源是__________，氮源是__________。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于__________培养基。按照化学成分分类，该培养基属于________培养基。从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于__________。

(2)将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中，适宜条件下培养，定时取样测定菌体数目，以时间为横坐标，以细菌数目的对数为纵坐标，可得到细菌的__________曲线。该曲线中以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　

___________________________________________________________________________。

实验室中，为了获得形态和生理特征一致的菌体，一般应在__________期取材；在生产中，常搜集培养至__________期的细菌用于次级代谢产物的提取。

10．固定化酶是从20世纪60年代迅速发展起来的一种技术。科研人员用海藻酸钠作为包埋剂来固定小麦酯酶，以研究固定化酶的相关性质和最佳固定条件。酶活性为酶催化化学反应的总效率。下图甲、乙、丙为部分研究结果。下列有关叙述中，错误的是　 　(　)

A．由甲图可知，固定化酯酶比游离酯酶对温度变化适应性更强

B．由乙图可知，浓度为4%的海藻酸钠包埋效果最好

C．由丙图可知，固定化酯酶一般可重复使用3次，之后若继续使用则酶活力明显下降

D．固定化酶的酶活力较高，主要原因是增加了酶与底物的接触面积