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    T-DNA可能随机插入植物基因组内.导致被插入基因发生突变.用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥.待植物形成花蕾时.将地上部分浸入农杆菌(其中的T-DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化.在适宜条件下培养.收获种子(称为 代). (1)为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾.需要去除 .因为后者产生的 会抑制侧芽的生长. (2) 为筛选出已转化的个体.需将T代播种在含 的培养基上生长.成熟后自交.收获种子(称为T代). (3) 为筛选出具有抗盐性状的突变体.需将T代播种在含 的培养基上.获得所需个体. (4)经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体.为确定抗盐性状是否由单基因突变引起.需将该突变体与 植株进行杂交.再自交 代后统计性状分离比. (5)若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失. 从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性 . (6)根据T-DNA的已知序列.利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段. 其过程是:提取 植株的DNA.用限制酶处理后.再用 将获得 的DNA片段连接成环以此为模板.从图中A.B.C.D四种单链 DNA片断中选取 作为引物进行扩增.得到的片断将用于获取该基因的全序列信息. 【查看更多】

     

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