分析回答下列Ⅰ、Ⅱ题

Ⅰ罗非鱼是杂食性鱼类，在珠江三角洲地区大量养殖，能适应咸、淡水环境。

（l）当罗非鱼由淡水进入咸水，机体会大量脱水，细胞外液渗透压         ，渗透压感受器产生兴奋，并将兴奋传给____    ，促使其释放        ，该物质的作用是         。

（2）某实验基地水库中放养了一批罗非鱼。其监测数据显示，a~e段这种罗非鱼的种群数量发生了明显波动，调查发现有人在该水库中放生了大型肉食性鱼（FNE）；一段时间后，罗非鱼种群数量达到了相对稳定状态（见图9）。图中显示，罗非鱼种群在a~b段呈    型增长。据图可知，FNE进入水库后，在捕食压力下，罗非鱼种群的环境容纳量接近    。

（3）富营养化导致藻类大量繁殖，该水库出现水华现象，浮游动物和鱼类均受到影响。请用文字和箭头描述藻毒素从产毒藻逐级积累到FNE体内的途径。                                           

Ⅱ图l表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题

（1）限制性核酸内切酶的酶切点是连接两个核苷酸之间的             。

（2）若用限制酶Smal完全切割图1中DNA片段，产生的末端是         末端，其产物长度为        。

（3）若图l中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有 _____ 种不同长度的DNA片段。

（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是____    。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，请你设计一个筛选方案：                       。

 

回答有关生物技术的问题。

I、抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两种合成途径的研究。下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。

 

（1）在获取抗体之前，需要向健康人体注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重复注射一次。免疫学称细胞A为              ，该细胞在人体主要介导                 免疫。

（2）过程①至②抗体的获取称为         　　   　     ，其中①是     　　　          过程，Y细胞称为                。

II、上图中，结构甲的建构可用下图1和2表示。图1表示含有目的基因的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为下表所示。

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
识别序列及切割位点

（3）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为                。

（4）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有

       种不同长度的DNA片段。

（5）上述结构中的建构过程可知，在限制酶作用下得到的产物有多种，生产上多采用

       技术来降低目的基因分离提取的难度，也有利于限制酶的回收和再利用。

（6）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行拼接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是     。在导入重组质粒后，为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，一般需要添加      的      （固体/液体）培养基进行培养。在培养前，培养基必须先经过灭菌，所用的方法是              ；采用          的方法接种以获得单菌落后继续筛选。

3．(2012·江苏，32)图①表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图②表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C^↓CGG、G^↓GATCC、^↓GATC、CCC^↓GGG。请回答下列问题：

(1)图①的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由________________________连接。

(2)若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图①中DNA片段，产生的末端是________末端，其产物长度为________________________。

(3)若图①中虚线方框内的碱基对被T—A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图①及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有________种不同长度的DNA片段。

(4)若将图②中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是________。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加________的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。

3．(2012·江苏，32)图①表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图②表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C^↓CGG、G^↓GATCC、^↓GATC、CCC^↓GGG。请回答下列问题：

(1)图①的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由________________________连接。

(2)若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图①中DNA片段，产生的末端是________末端，其产物长度为________________________。

(3)若图①中虚线方框内的碱基对被T—A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图①及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有________种不同长度的DNA片段。

(4)若将图②中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是________。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加________的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。

苏云金杆菌是一种对昆虫有毒害作用的细菌,其杀虫活性物质主要是一类伴孢晶体蛋白。伴孢晶体蛋白经昆虫肠液消化成毒性肽,并因此导致昆虫死亡。自从培育转基因植物抗虫棉成功后，研究人员又试图将抗虫基因导入水稻细胞中，从而培养出转基因抗虫水稻。研究人员从相关生物体内提取出的部分物质或结构如下图所示：图1表示含有目的基因（抗虫基因）的DWA片段长度(bp为碱基对）和部分碱基序列，图2表示作为运载体的一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp I,BamH I,Mbo I ，Sma I 4种限制性核酸内切酶，它们所识别的碱基序列和酶切位点（用“↓”表示）分别为C ↓CGG；G ↓ GATCC；n↓ GATC；CCC ↓ GGG。请回答下列问题：

(1)若用限制酶Sma I完全切割图1中所示DNA片段，则其产物有______种，长度分别为______。

(2)若将图2中质粒和目的基因通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______。

(3 )在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的水稻细胞，需配置相应培养基，其中添加的碳源是______，目的是提供营养和______。另外，培养基中除了含有必要营养物质、琼脂和激素外，一般还需要添加______(抗生素A/抗生素B)，该培养基从用途上看属于______培养基。

(4)在培养过程中，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程必须保证无菌，镊子等器械及培养基都可使用的灭菌方法是______。