(10分)肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术的基本流程如下图甲所示。

请回答：

(1)进行过程①时，需用　　　　酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为　      。

(2)进行过程②时，需用　　　　酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

(3)研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图乙所示。据图分析，可从细胞中提取　　　　　　　进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中　　　　　　(选填 “RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。

肺细胞中的let一7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

(1)进行过程①时，需用             酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时，需用         酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于 细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时，在PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg²⁺)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在该反应体系中，目的基因扩增了5代，则具有引物I的DNA所占的比例理论上为        。

(2)研究发现，let一7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取    进行分子杂交，以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中    (RASmRNA／RAS蛋白质)含量减少引起的。

(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子，说明此DNA分子的形态为                  。

(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段(kb为千个碱基对)：

可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有            个识别序列。两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoR I处理，结果导致凝胶上3．0 kb的片段消失，产生一种1.5 kb的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割，则可得到长度分别为           的片段。

肺细胞中的let一7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

(1)进行过程①时，需用_______________酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时，需用_______________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时，在PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg²⁺)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在该反应体系中，目的基因扩增了5代，则具有引物I的DNA所占的比例理论上为_______________。

(2)研究发现，let一7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取_______________进行分子杂交，以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_______________(RASmRNA／RAS蛋白质)含量减少引起的。

(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子，说明此DNA分子的形态为______________________________。

(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段(kb为千个碱基对)：

可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有_______________个识别序列。两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoR I处理，结果导致凝胶上3．0 kb的片段消失，产生一种1.5 kb的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割，则可得到长度分别为_______________的片段。

研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答。

1）.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是                          ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为        。

2）.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是                。

3）.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是              ， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是    ，这 两种酶作用的化学键都是          。

4）.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用　　 　　酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

5）.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是　　                               　    　。

肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该技术基本流程如图１。

（１）进行过程①时，需用      酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为       。
（２）进行过程②时，需用   酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取      进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中        （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。