干扰素是动物或人体细胞受病毒感染后产生的一类糖蛋白，具有抗病毒、抑

制肿瘤及免疫调节等多种生物活性。请分析回答：

⑴干扰素的产生受细胞内基因的控制，通常处于抑制状态。在病毒刺激下，干扰素基因

经转录、翻译形成干扰素前体，进一步加工成具有一定??????????????? 的蛋白质，这是它们具有生物活性的前提，最后通过??????? 方式分泌到细胞外。

⑵某些干扰素可作用于宿主细胞膜上的相应???????? ，激活该细胞核中基因表达产生多种抗病毒蛋白，其中有些蛋白可通过激活RNA酶使病毒的mRNA ????? ，有些则可与核糖体结合，通过抑制病毒多肽链的合成发挥抗病毒作用。

⑶某些干扰素可抑制肿瘤细胞DNA的合成，通过减慢细胞????? 分裂过程抑制肿瘤。还

有些干扰素可提高吞噬细胞将抗原呈递给??????? 细胞的能力，从而在免疫调节中发挥作用。

⑷获取干扰素的传统方法是从人的白细胞中提取，但产量很低。科学家采用转基因技术将重组DNA导入牛的受精卵中，经胚胎早期培养一段时间后移植入母体内发育成熟，即可获得能产生干扰素的转基因牛，大大提高了干扰素的产量。请回答以下问题：

①利用??????? 酶将干扰素基因与牛乳腺蛋白基因的启动子（即RNA聚合酶结合的部位）等调控组件连接在一起。

②基因工程操作过程的实现至少需要三种必要的工具：限制性核酸内切酶、???????????? 、_____________。

③其中，与“限制性核酸内切酶”作用部位完全相同的酶是_______________。

A．逆转录酶??????? B．RNA聚合酶??????? C．DNA连接酶?????? D．解旋酶

（10分）2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？并说出理由：                                  
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是     。
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是         。获得的转基因克隆猪，可以通过对抗原表达基因的改造从而解决的医学难题是：可以避免             。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：        （用数字表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列   ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列 ③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）   ④表达出蓝色荧光蛋白。

（10分）2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

    注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？并说出理由：                                    

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是      。

（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是          。获得的转基因克隆猪，可以通过对抗原表达基因的改造从而解决的医学难题是：可以避免               。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：          （用数字表示）。

     ①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列    ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列  ③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）    ④表达出蓝色荧光蛋白。