花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力，再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。（6分）

据图回答下列问题：

（1）过程①所需的酶是                 。

（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的         存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是保持原生质体完整性。原生质体经过           再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

（4）对杂种植株进行            接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。

（5）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和            植株的根尖，通过解离 、漂洗、染色和制片等过程制成装片，然后在______下观察比较染色体的形态和数目。

 

请分析回答下面问题：(13分)

植物叶肉细胞原生质体的分离和培养主要过程可用图解简单表示：

（1）原生质体的结构包括　　　 、　　　 、　　　 三部分构成。

（2）培育胚状体利用了　　　　　　　　 这一项生物技术，培养基中除了含有一定的营养外，还必须含有　　　 等植物激素，还需要对培养基进行严格的　　　　　　 。

（3）从叶片的叶肉细胞到愈伤组织再分化形成的胚状体再继续培养，则可培育出完整的植株，这体现了　　　　　 。

（4）从叶片的叶肉细胞到获得胚状体的过程中，需要经过　　　 。

①无丝分裂　 ②有丝分裂　　　 ③减数分裂　 ④原代培养

⑤传代培养　 ⑥植物体细胞杂交 ⑦细胞融合　 ⑧脱分化　 ⑨再分化

A．①④⑤⑦⑧　 B. ②④⑤⑥⑧⑨　 C．②⑧⑨ D．③⑥⑧⑨

（5）从图解可知，需要在培养基中加入激素调整细胞分裂分化的是　　　 （用字母a～e回答）阶段，若为了获得三七的细胞产物，则只需培养到　　　　　　　　 。若为了获得三七的人工种子，则需要培养到　　　　　　　　 。

（6）如果以该植物细胞作为基因工程的受体细胞可以选用　　　　　　　 和花粉管通道法完成导入受体细胞的步骤。

Ⅰ. （9分）(除注明外，每空1分)

下表是植物细胞分裂素发现过程中的几个主要历程。请据此作答。   

历程	时间	科学家	科学事实
①	1954年	斯库格等	一定条件下腺嘌呤能促进细胞分裂
②	1955年	米勒等	将存放了4年的鲱鱼精细胞的DNA，加入到烟草髓组织的培养基中，能诱导细胞分裂。
③	1956年	斯库格等	用新提取的鲱鱼精细胞DNA，不能促进细胞分裂；但在pH＜4的条件下进行高压灭菌处理后，却能促进细胞分裂。从处理物中分离出这种活性物质，并命名为“激动素”。
④	1963年	莱撒姆	从未成熟的玉米籽粒中分离出类似于“激动素”的促进细胞分裂的物质，命名为“玉米素”，其生理活性高于“激动素”。

（1）DNA彻底水解的产物是______________。

（2）“激动素”______________（“属于”或“不属于”）植物激素。理由是______________。

（3）从②和③分析，“激动素”可能是______________（物质）。请写出对此加以验证的简要实验思路：将____________________加入烟草髓组织的培养基中，观察结果。(2分)

（4）植物体合成细胞分裂素的主要部位是____________，细胞分裂素与____________（激素）存在拮抗作用。

（5）在植物组织培养中，通过调整细胞分裂素与________________（激素）的比例，可诱导愈伤组织形成完整的植株。

Ⅱ.（9分）请回答下列生物技术方面的问题：

（1）测定亚硝酸盐含量的操作程序是：①配制溶液；②______________；③制备样品处理液；④___________。泡菜发酵过程中产生的亚硝酸盐在盐酸酸化条件下，与对氨基苯磺酸的反应产物能与N-1-萘基乙二胺盐酸盐偶联成______________色化合物。

（2）固定化酶是从20世纪60年代迅速发展起来的一种技术。东北农业大学科研人员利用双重固定法，即采用戊二醛作交联剂(使酶相互连接)，海藻酸钠作为包埋剂来固定小麦酯酶，研究固定化酶的性质，并对其最佳固定条件进行了探究。下图显示的是部分研究结果 (注：酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量)。

①酶的固定化技术的应用最主要的目的是_______________________。

②从对温度变化适应性和应用范围的角度分析，甲图所示结果可以得出的结论是__________________________________________________________________。

③乙图曲线表明浓度为____________的海藻酸钠包埋效果最好。

④研究人员固定小麦酯酶不采用海藻酸钠直接包埋，而是同时用戊二醛作交联剂，这是因为___________________________________________________。

⑤根据介绍，科研人员所采用的固定化技术可用下图中的______ 表示。

     

(3)上右图为某同学利用海藻酸钠固定小麦酯酶的实验结果，出现此结果的可能原因不包括_________

A．海藻酸钠浓度过高            

B．酵母细胞已经死亡

C．注射器中的溶液推进速度过快

D．注射器距离CaCl₂溶液液面太近