在没有乳糖的培养基中生长的大肠杆菌细胞中含有的物质或结构是

A．乳糖    B．半乳糖苷酶          C．半乳糖         D．半乳糖苷酶基因

大肠杆菌的乳糖操纵子含有3个结构基因：

编码：—半乳糖苷酶基因lacZ 

编码：—半乳糖苷透性酶基因lac Y

编码：—半乳糖苷转乙酸基酶基因lac A

乳糖操纵子受Lacl（阻遏物）控制。阻遏物在乳糖存在下被钝化，乳糖是诱导物。有许多乳糖类似物，例如邻位硝基苯——D一半乳糖苷（ONPG），它是—半乳糖苷透性酶的底物，但不是诱导物。这个反应产生邻位硝基苯，对细胞是有毒的。异丙基——D半乳糖苷（IPTG），是诱导物，但不是—半乳糖昔酶的底物。苯基——D半乳糖苷（PG）是—半乳糖苷酶的底物，但不是诱导物。它的水解产物对细胞是没有毒的。

9.1．在培养基加入PG作为唯一的碳源与能源，哪种细胞可以生长？

    A．lac I^—     B．lac Z^—     C．lac Y^—     D．lac Z^—lac Y^—

    E．lac I^—lac Z^—

9.2．在有ONPG的培养基中细胞能否生长？

    A．能   B．不能

37．（8分）大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中，如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出口一半乳糖苷酶。当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被β一半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。

       请分析并回答：

   （1）已获得的目的基因可利用    技术进行扩增。

   （2）目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中，需要DNA连接酶恢复       键。

   （3）将试管I中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是        ；大肠杆菌需事先用Ca²⁺进行处理，目的是         。

   （4）将试管Ⅱ中的菌液接种于选择培养基上培养，培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质包括    和生长因子，还应加入IPTG、X-gal以及氨苄青霉素，其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出        。

   （5）若观察到培养基上出现    色菌落，则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因，则不利于重组质粒的筛选，原因是          。

大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b半乳糖苷酶。如果培养基中含有IPTG和X-gal，X-gal便会被b半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b半乳糖苷酶，培养基中X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。下图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：

（1）作为受体大肠杆菌应__________________________，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用__________处理过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入在试管Ⅰ中制备好的DNA。

（2）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。

（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：

①                                                         。

②                                                         。

③                                                         。

（12分）大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出b-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被b-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达b-半乳糖苷酶，培养基中的X-gal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。右图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题：
（1）作为受体大肠杆菌应__________________________，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用__________溶液处理（增加其细胞壁的通透性）过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入在试管Ⅰ中制备好的DNA。
（2）图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入____________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。
（3）将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：
①                                                                     。
②                                                                     。
（4）应如何设计检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒培养的对照实验？