动物乳腺生物反应器是一项利用转基因动物的乳腺代替传统的生物发酵，进行大规模生产可供治疗人类疾病或用于保健的活性蛋白质的现代生物技术。目前科学家已在牛和羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素等重要药品。大致过程如图所示：

(1)在过程③中需要用到的工具酶有??? 。要使人的药用蛋白基因在奶牛乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、?? ? 、标记基因等部分。

(2)要实现超数排卵，应在性成熟雌牛发情周期的某一阶段用??? 处理。通过①采集的精子不能直接使成熟的卵子受精，原因是 ?? ?? 。

(3)将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过??? 处理的受体母牛子宫内。因为我们对细胞所需的营养条件还没有完全搞清楚，所以，在早期胚胎的培养基中，往往还需要添加? ? 。

(4)若要一次获得多只完全相同的转基因牛，应采用胚胎分割移植技术。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意将??? 均等分割。胚胎分割移植后发育成小牛，这些小牛的基因型??? (填“相同”或“不同”)。

（15分）生物选做题
A．[生物技术实践] 啤酒是我们日常生活中最常见的饮料之一。在啤酒生产过程中，发酵是重要环节。生产过程大致如下：将经过灭菌的麦芽汁充氧，接入啤酒酵母菌菌种后输入发酵罐。初期，酵母菌迅速繁殖，糖度下降，酒精浓度渐渐上升，泡沫不断增多。当糖度下降到一定程度后，结束发酵。最后分别输出有形物质和啤酒。根据上述过程，回答以下问题：
（1）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。
步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意      和      ，加琼脂后灭菌，制成固体平板。
步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂布平板。
步骤4：根据                          筛选出突变菌。
（2）酿酒过程中，经检测活菌数量适宜但却不产生酒精，应采取的措施是                    。
（3）为研究发酵罐中酵母菌的生长状况，常要取样统计分析，并测定pH值，判断取样先后顺序的主要依据是                                              。
（4）小麦脱粒以后还有大量的麦秆，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌无法直接利用，原因是                     。请提出解决该问题的方法。（列举两种方法）
                                                                       
（5）突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物的作用是                                    ，加入DNA聚合酶的作用是                                            。
B．[现代生物科技专题] 继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：
（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是               。
（2）在基因工程中，将目的基因与运载体结合时必须用            酶和         酶。常用的运载体有            等，而作为运载体必须具备相应的条件，例如应具有             以便进行筛选。进行基因转移时，通常要将外源基因转入        中，原因是                。
（3）通常采用      __________   技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。
（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的          细胞中特异性表达。
（5）为使外源基因在后代中长期保持，可将转基因小鼠体细胞的        转入        细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。该技术称为          。

生物选做题

A．[生物技术实践] 啤酒是我们日常生活中最常见的饮料之一。在啤酒生产过程中，发酵是重要环节。生产过程大致如下：将经过灭菌的麦芽汁充氧，接入啤酒酵母菌菌种后输入发酵罐。初期，酵母菌迅速繁殖，糖度下降，酒精浓度渐渐上升，泡沫不断增多。当糖度下降到一定程度后，结束发酵。最后分别输出有形物质和啤酒。根据上述过程，回答以下问题：

（1）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：

    步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。

    步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意       和       ，加琼脂后灭菌，制成固体平板。

    步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂布平板。

    步骤4：根据                           筛选出突变菌。

（2）酿酒过程中，经检测活菌数量适宜但却不产生酒精，应采取的措施是                     。

（3）为研究发酵罐中酵母菌的生长状况，常要取样统计分析，并测定pH值，判断取样先后顺序的主要依据是                                               。

（4）小麦脱粒以后还有大量的麦秆，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌无法直接利用，原因是                      。请提出解决该问题的方法。（列举两种方法）

（5）突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物的作用是                                     ，加入DNA聚合酶的作用是                                             。

B．[现代生物科技专题] 继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：

（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是                。

（2）在基因工程中，将目的基因与运载体结合时必须用             酶和          酶。常用的运载体有             等，而作为运载体必须具备相应的条件，例如应具有              以便进行筛选。进行基因转移时，通常要将外源基因转入         中，原因是                 。

（3）通常采用      __________    技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。

（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的           细胞中特异性表达。

（5）为使外源基因在后代中长期保持，可将转基因小鼠体细胞的         转入         细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。该技术称为           。

【生物一现代生物科技专题】

国家863计划项目“利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用蛋白”取得重大进展。目前，已经成功获得经纯化的抗凝血酶III蛋白，达到国际先进水平。下面是制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图：

   （1）根据流程图分析，动物乳腺生物反应器主要利用了_____技术、胚胎工程技术和细胞培养技术。

   （2）要实现①超数排卵，应在崂山奶山羊A发情周期的某一阶段用______处理，然后在恰当时期进行        收集卵子。通过②采集的精子不能直接使成熟的卵子受精，原因是____________________________________________________________

   （3）过程④需将抗凝血酶III基因注入受精卵的雄原核内，在显微镜下判断是否完成受精作用的标志是________________________。

   （4）要使人的抗凝血酶III基因在山羊乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、__________、标记基因等部分。在⑤之前要检测早期胚胎细胞是否已经导人抗凝血酶III基因，宜采用_________________技术

   （5）若要一次获得多只完全相同的转基因崂山奶山羊D，⑤应采用_____________技术。

（8分）【生物一现代生物科技专题】
国家863计划项目“利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用蛋白”取得重大进展。目前，已经成功获得经纯化的抗凝血酶III蛋白，达到国际先进水平。下面是制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图：

（1）根据流程图分析，动物乳腺生物反应器主要利用了_____技术、胚胎工程技术和细胞培养技术。
（2）要实现①超数排卵，应在崂山奶山羊A发情周期的某一阶段用______处理，然后在恰当时期进行       收集卵子。通过②采集的精子不能直接使成熟的卵子受精，原因是____________________________________________________________
（3）过程④需将抗凝血酶III基因注入受精卵的雄原核内，在显微镜下判断是否完成受精作用的标志是________________________。
（4）要使人的抗凝血酶III基因在山羊乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、__________、标记基因等部分。在⑤之前要检测早期胚胎细胞是否已经导人抗凝血酶III基因，宜采用_________________技术
（5）若要一次获得多只完全相同的转基因崂山奶山羊D，⑤应采用_____________技术。