2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

（1）过程①必需用到的酶是                 。

（2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有启动子、终止子和          

才能构成一个完整的基因表达载体。

（3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是         。然后还要通过            技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上。

（4）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射促性腺激素的方法，做              处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到                   期即可通过显微操作将其细胞核去除。

（5）如果想同时得到多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，可通过胚胎分割技术得以实现。但应选择发育到               时期的早期胚胎进行操作，且要注意将内细胞团           ，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

（8分）2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

⑴过程①必需用到的酶是　　　　　　　　 。

⑵重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有启动子、终止子和　　　　　

才能构成一个完整的基因表达载体。

⑶过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是　　　　 。然后还要通过　　　　　 技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上。

⑷为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射促性腺激素的方法，做　　　　　　

处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到　　　　　　　　　 期即可通过显微操作将其细胞核去除。

(5)如果想同时得到多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，可通过胚胎分割技术得以实现。但应选择发育到　　　　　　　 时期的早期胚胎进行操作，且要注意将内细胞团　　　　　 ，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

回答下列有关基因工程和克隆技术的问题。（10分）

2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

63、说出绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中用到了哪些生物工程技术？           　

利用了哪些原理？                      （本题答案从下列所给选项中选择填写）

①转基因技术；②细胞核移植技术；③胚胎移植技术；④干细胞技术；⑤动物细胞培养技术

⑥基因突变；⑦基因重组；⑧动物细胞核具有全能性；⑨动物细胞具有全能性

64、过程①②中必需用到的酶分别是                和                 。绿色荧光蛋白基因之所以能与质粒重组，原因是                                               。

65、早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及               等物质。

通过上图中过程①的方法获取目的基因的数量是有限的，要获得大量的绿色荧光蛋白基因可以利用PCR技术。PCR扩增反应（如下图所示）中加入的TaqDNA聚合酶能在接近沸点的条件下，发挥延伸DNA子链的作用，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。请回答：

PCR（DNA聚合酶链式反应）技术示意图：

66、你认为TaqDNA聚合酶一定是从下列哪种生物体细胞中分离提取的？        

A．水母细胞         B．猪胎儿成纤维细胞   　C．极端嗜热菌     D．大肠杆菌

67、下面的表达式不能反映TaqDNA聚合酶的功能，为什么？                           。

68、用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点和标出碱基对数。（2分）

（10分）绿色荧光蛋白能在紫外光的激发下发出荧光，水母中含有绿色荧光蛋白基因。2006年12月22日，我国首例3头“绿色荧光蛋白转基因猪”诞生。绿色荧光蛋白转基因猪培育过程示意图如下：

请回答相关问题。
（1）绿色荧光蛋白基因一般在基因工程中最适于做              基因。
（2）②过程所需要的酶有                     ，③表示将重组DNA导入受体细胞，常采用的方法：                    。
（3）绿色荧光蛋白转基因猪是否培育成功，需要经过鉴定。请简要写出鉴定方法，以及能说明转基因成功的现象?
（4）经过鉴定，其中有2头在转基因性状上表现明显。另一头还有待DNA鉴定，其方法是用                  制成探针，然后再进行检测。

（10分）绿色荧光蛋白能在紫外光的激发下发出荧光，水母中含有绿色荧光蛋白基因。2006年12月22日，我国首例3头“绿色荧光蛋白转基因猪”诞生。绿色荧光蛋白转基因猪培育过程示意图如下：

       请回答相关问题。

   （1）绿色荧光蛋白基因一般在基因工程中最适于做               基因。

   （2）②过程所需要的酶有                      ，③表示将重组DNA导入受体细胞，常采用的方法：                     。

   （3）绿色荧光蛋白转基因猪是否培育成功，需要经过鉴定。请简要写出鉴定方法，以及能说明转基因成功的现象?

   （4）经过鉴定，其中有2头在转基因性状上表现明显。另一头还有待DNA鉴定，其方法是用                   制成探针，然后再进行检测。