39.【生物 ——选修1：生物技术实践】（15分）

有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：

⑴在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________________培养基。

⑵纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________________和________________。

⑶为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________________。

⑷通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________________和________________。无菌技术要求试验操作应在酒精灯________________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精但对酒精的耐受能力较差。下面是利用木糖发酵产生酒精的酿酒酵母的培育过程，请分析回答下列问题。

(1)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，瓶中的液体经适当稀释后，用________方法接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落。

(2)将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖为唯一碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌________。从存活的酵母菌提取DNA，并用PCR技术大量扩增目的基因。

(3)将目的基因连接到一种穿梭质粒(可以在大肠杆菌中复制和在酿酒酵母中表达的质粒)上。该质粒具有两种标记基因，即氨苄青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大肠杆菌被该质粒转化后，应接种于含________的培养基上进行筛选。将质粒导入酵母菌时，由于氨苄青霉素不能抑制酵母菌繁殖，应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。从细胞结构看，酵母菌不同于大肠杆菌的主要特点是________。

(4)对转基因酿酒酵母发酵能力进行测试，结果如图所示：

据图分析，将转基因酿酒酵母接种在以________为碳源的培养基中进行发酵能力测试，最初培养基中的________糖被快速消耗，随着发酵继续进行，转基因酿酒酵母能够___________________，说明所需菌株培育成功。

有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以                 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于           培养基。
（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即
           和              。
（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力         。
（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、
           和              。无菌技术要求试验操作应在酒精灯           附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。