(四)实验操作指导 1.无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键 ①植物组织培养不同于扦插.分根.叶插等常规无性繁殖.由于植物组织培养所利用的植物材料体积小.抗性差.所以对培养条件的要求较高.用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长.如一些细菌.真菌等的生长.而培养物一旦受到微生物的污染.就会导致实验前功尽弃.因此要进行严格的无菌操作. ②无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料的消毒灭菌.对培养材料进行表面灭菌时.一方面要考虑药剂的消毒效果,另一方面还要考虑植物材料的耐受能力.不同药剂.不同植物材料.甚至不同器官要区别对待. ③对接种操作中污染情况的分析:接种3-4 d后.在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象.一般情况下.细菌污染可能是由接种人员造成的.如未戴口罩.接种时说话.或手及器械消毒不严等.真菌污染可能是植物材料灭菌不当. ④妥善处理被污染的培养物:操作后常出现培养物被污染的情况.一旦发现培养材料被污染.特别是真菌性污染.一定不要打开培养瓶.应先将所有被污染的培养瓶统一放在高压蒸汽锅内进行高压蒸汽灭菌.然后再打开培养瓶.进行清洗. ⑤有毒药品的用后处理:外植体灭菌用过的有毒药品要妥善处理.以免引起环境污染. 2.设置对照实验和重复组 通过设置重复组和对照组可以选出最佳的实验材料.最好的培养基配方.找出实验失败的原因.如设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶.与接种操作后的锥形瓶一同培养.用以说明培养基制作是否合格.有没有被杂菌污染. 【
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