在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。

请据图回答：（1）A过程需要的酶有__________________________________________。
（2）为了增加目的基因(抗虫基因)的数量，可以利用           技术进行快速复制，其过程是：目的基因DNA受热变性后解旋为单链；引物与单链相应互补序列结合，然后在       酶的作用下进行延伸，如此循环。
（3）基因表达载体就是指的是基因表达载体，一个完整的基因表达载体一般应包括                 、                 、目的基因、              及复制原点等五个部分。
（4）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是____________________、
____________________________________________________________。
（5）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入________________。
（6）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用________________作为探针。

在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。

请据图回答：（1）A过程需要的酶有__________________________________________。

（2）为了增加目的基因(抗虫基因)的数量，可以利用           技术进行快速复制，其过程是：目的基因DNA受热变性后解旋为单链；引物与单链相应互补序列结合，然后在       酶的作用下进行延伸，如此循环。

（3）基因表达载体就是指的是基因表达载体，一个完整的基因表达载体一般应包括                 、                 、目的基因、              及复制原点等五个部分。

（4）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是____________________、

____________________________________________________________。

（5）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入________________。

（6）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用________________作为探针。

请分析回答下列有关基因工程问题：

Ι 基因工程是按人们预先设计的蓝图，将目的基因通过一定方法导入到另一种生物的细胞中，使之产生符合人类需要的新的遗传性状或创造出新的生物类型的现代技术。

57.基因工程常用的三种工具为限制性内切酶、　　　　　　 、质粒，通常选择质粒作为“目的基因的运输载体”是由于　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

58.基因工程一般包括四步：获取目的基因；目的基因与运载体重组；　　　　　　　 ；

　　　　　　　　　 　　。

Ⅱ 在基因工程中通常需要利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR如右图示，包括三个基本反应步骤：①模板DNA的变性：模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后双链解离；②模板DNA与引 物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，合成一条新的与模板DNA 链互补的脱氧核苷酸链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得较多的目的基因。

59.温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物时所遵循的原则是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

60.在PCR技术中，引物的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

61.从理论上推测，第三轮循环产物中含有引物B的DNA片段所占比例为　　　　　　　　 。

62.下图表示利用PCR技术获取目的基因X的第一次循环产物。则至少需要在　　　 轮循环产物中才能开始出现独立且完整的的X基因。如果经过n次循环，则产物中①所示DNA分子数为　　　　　　 。

63.用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点。