35.（7分）棉铃虫是一种危害棉花的害虫。我国科学工作者发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金杆菌能分泌一种毒蛋白使棉铃虫致死，而这种毒蛋白对人畜无害。通过基因工程方法，科学家采用花粉管通道法将毒蛋白基因转入棉花植株并成功表达，棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡。花粉管通道法是指：利用植物花粉萌发时形成的花粉管通道将毒蛋白基因送入胚囊，进而导入尚不具备细胞壁的合子或早期胚细胞，最终形成含有目的基因的种胚。此种方法的优点是操作简便，省去了组培的复杂过程。

（1）利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞，此过程是基因操作的基本步骤中的第三步，即                  。构建基因表达载体时要把目的基因整合到Ti质粒的T-DNA上，其原因是                    。

（2）基因工程的工具酶可以将目的基因切下并连接到运载体上。限制酶可以识别特定的DNA序列，并切断         键。下列所示的黏性末端是由         种限制酶作用产生的。

（3）用标记的特异性抗体可以直接检测毒蛋白，这种检测方法称为                 。

也可在宏观性状水平检测该目的基因是否表达，方法是                  。已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞                 。

植物虽不能动，但却具有某些防御机制以对抗外界的伤害，如利用体表的毛、刺、几丁质或木栓质来保护植株本身免于受伤害；也会利用囊泡内的次级代谢物（如植物碱和单宁酸等）来防御掠食者；更会分泌化学物质抑制别种植物的种子萌芽或生长，以降低资源竞争。有些植物的次级代谢物可用于制药，如奎宁（quinine）。无论草食动物或侵略者是否存在，这些防御构造或化学物质一直存在植物体。

伤害也可诱导植物产生防御机制，如叶片被寄生蜂咬伤时，植物会快速产生与草食动物消化酵素结合的蛋白酶抑制剂。从蕃茄的实验结果得知，受伤的叶子会将系统素前驱蛋白切割出由18个胺基酸组成的系统素（systemin），经由受伤组织的细胞壁或细胞间隙运输到邻近的韧皮部，再传送到整个植物体。系统素会与细胞膜的受器结合，引起细胞内产生茉莉酸（jasmonic acid），并传讯给细胞核内相关的基因，使整株植物产生蛋白酶抑制剂，达到防御的效果。下列有关蕃茄诱导防御机制之叙述，哪些正确？（应选三项）

A 植物体受伤时，会诱导系统素的产生

B 系统素与茉莉酸结合而活化防御机制

C 系统素在细胞壁和细胞间隙移动，进入韧皮部而传遍全株

D 系统素将讯息直接传递给细胞核内相关的基因，并令其产生蛋白质抑制剂

E 茉莉酸将讯息传递给细胞核内的特定基因，并进而在细胞质内制造蛋白

酶抑制剂

植物虽不能动，但却具有某些防御机制以对抗外界的伤害，如利用体表的毛、刺、几丁质或木栓质来保护植株本身免于受伤害；也会利用囊泡内的次级代谢物（如植物碱和单宁酸等）来防御掠食者；更会分泌化学物质抑制别种植物的种子萌芽或生长，以降低资源竞争。有些植物的次级代谢物可用于制药，如奎宁（quinine）。无论草食动物或侵略者是否存在，这些防御构造或化学物质一直存在植物体。

伤害也可诱导植物产生防御机制，如叶片被寄生蜂咬伤时，植物会快速产生与草食动物消化酵素结合的蛋白酶抑制剂。从蕃茄的实验结果得知，受伤的叶子会将系统素前驱蛋白切割出由18个胺基酸组成的系统素（systemin），经由受伤组织的细胞壁或细胞间隙运输到邻近的韧皮部，再传送到整个植物体。系统素会与细胞膜的受器结合，引起细胞内产生茉莉酸（jasmonic acid），并传讯给细胞核内相关的基因，使整株植物产生蛋白酶抑制剂，达到防御的效果。下列有关蕃茄诱导防御机制之叙述，哪些正确？（应选三项）

A 植物体受伤时，会诱导系统素的产生

B 系统素与茉莉酸结合而活化防御机制

C 系统素在细胞壁和细胞间隙移动，进入韧皮部而传遍全株

D 系统素将讯息直接传递给细胞核内相关的基因，并令其产生蛋白质抑制剂

E 茉莉酸将讯息传递给细胞核内的特定基因，并进而在细胞质内制造蛋白

酶抑制剂

植物虽不能动，但却具有某些防御机制以对抗外界的伤害，如利用体表的毛、刺、几丁质或木栓质来保护植株本身免于受伤害；也会利用囊泡内的次级代谢物（如植物碱和单宁酸等）来防御掠食者；更会分泌化学物质抑制别种植物的种子萌芽或生长，以降低资源竞争。有些植物的次级代谢物可用于制药，如奎宁（quinine）。无论草食动物或侵略者是否存在，这些防御构造或化学物质一直存在植物体。
伤害也可诱导植物产生防御机制，如叶片被寄生蜂咬伤时，植物会快速产生与草食动物消化酵素结合的蛋白酶抑制剂。从蕃茄的实验结果得知，受伤的叶子会将系统素前驱蛋白切割出由18个胺基酸组成的系统素（systemin），经由受伤组织的细胞壁或细胞间隙运输到邻近的韧皮部，再传送到整个植物体。系统素会与细胞膜的受器结合，引起细胞内产生茉莉酸（jasmonic acid），并传讯给细胞核内相关的基因，使整株植物产生蛋白酶抑制剂，达到防御的效果。下列有关蕃茄诱导防御机制之叙述，哪些正确？（应选三项）
A 植物体受伤时，会诱导系统素的产生
B 系统素与茉莉酸结合而活化防御机制
C 系统素在细胞壁和细胞间隙移动，进入韧皮部而传遍全株
D 系统素将讯息直接传递给细胞核内相关的基因，并令其产生蛋白质抑制剂
E 茉莉酸将讯息传递给细胞核内的特定基因，并进而在细胞质内制造蛋白
酶抑制剂