资阳市某中学高二一班的同学在寒假预习了选修1《生物技术实践》中所要求的7个实验后，就自主地分了几个学习小组，有的小组用新鲜苹果榨取果汁并制作果酒、果醋，有的小组还尝试用苹果的嫩叶进行组织培养、用胡萝卜提取胡萝卜素等，有的成功，有的失败了。小王和小刘同学根据同学们的实验设计了以下问题。

（1）实验过程中，第一小组同学发现榨取的果汁非常浑浊，他们采用的解决方法是      

           或用纤维素酶处理果汁。活细胞内合成该酶的原料是            。分离这种酶常用凝胶色谱法，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较________，装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是气泡会搅乱洗脱液中蛋白质___________，降低分离效果，洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体__________（填“相同”或“不同”）。

（2）第二小组要将酵母菌从其他细菌中分离出来，常采用向培养基中添加          

的方法，这种培养基叫做             培养基，若要知道混合菌中是否含有大肠杆菌，可采用向培养基添加                 ，观察到菌落呈        则证明有大肠杆菌。配制培养基时常用的灭菌方法为                  。

（3）在酸性条件下，可用              来检测发酵产物中是否有酒精产生．若想进一步检测所得果酒中酵母菌的数量，可采用                   法。

（4）发酵完成后，该班同学制作的果酒品质非常好，为方便后续年级长期使用，可将菌液用     的方法保存。

（5）第三小组用苹果的嫩叶进行组织培养，有以下操作：①外植体消毒，②制备MS培养基，③接种，④培养⑤栽培⑥移栽。其操作的正确顺序是______ 。

A．①→②→③→④→⑤→⑥       B．②→①→③→④→⑤→⑥

C．②→①→③→④→⑥→⑤     D．①→②→③→④→⑥→⑤

适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗生根,而与                配比适宜时可促进芽的增殖。植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的            ；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。

（6）当人体缺乏某种维生素时，可由β-胡萝卜素在体内转化形成，这种维生素是     

           ，提取胡萝卜素过程中，萃取加热时需安装回流冷凝装置，其目的是防止加热时__________________________。

 

I.近期，思念、三全、湾仔码头等企业生产的速冻食品相继检出金黄色葡萄球菌超标，“细菌门”事件引起公众的普遍关注。请回答下列问题：

(1)某小组欲检测果汁类食品中是否含有金黄色葡萄球菌。经查资料：葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。请完成下列实验

步骤：

①配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后调节___________，分装到锥形瓶后___________，在无菌状态下加入卵黄液（100 mL10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀）摇匀，立即倒平板。

②接种：取待检果汁2.5mL加入到22.5 mL的灭菌生理盐水中，制成接种样液。

实验组：将接种样液用___________法接种在含卵黄的固体培养基上。

对照组：将________用同样的方法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作空白对照。

将上述接种后的培养皿同时放在36 ⁰C的恒温箱中培养48h

③观察：观察培养基表面 _______________________________________________________

(2)葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl,所以在配制培养基时加入高浓度的NaCl可以将它分离出来。此培养基属于___________ 培养基。

(3)要统计每克果汁样品中活菌数目，宜采用___________法接种，根据果汁样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的___________就能大约推测出样品中活菌数。

Ⅱ．某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：

(1)分别配置_____________的培养基和__________的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；

(2)分别向A、B培养基接种___________；

(3)把接种后的培养基放在恒温箱中3d～4d；

(4)从A、B培养基上生长的菌落中挑取生长良好的菌株，分别接种到__________中；

(5)____________________________________________________________________________。

2．(17分)(2012·南昌一模)尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：

(1)如图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有________(写一种)。

(2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行________，灼烧的接种环冷却后才能接种的原因是______________________。

(3)下面是两种培养基的配方：

表1：A培养基配方

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	琼脂	H2O
1.4 g	2.1 g	0.2 g	10.0 g	1.0 g	15.0 g	1 000 mL

表2：B培养基配方

纤维素粉	Na2HPO4·	NaNO37H2O	KH2PO4	MgSO4·7H2O	KCl	酵母粉膏	H2O
5 g	1 g	1.2 g	0.9 g	0.5 g	0.5 g	0.5 g	1 000 mL

①配制培养基的操作步骤________(用字母顺序回答)。

a．倒平板　b．计算　c．溶化　d．称量　e．灭菌

②通常培养基采用____________法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是________________________。

③如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述________(A、B)配方的培养基，在该培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。

④据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是________。

(4)如果进一步从尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技术扩增，则每次循环复制可分为________________三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成________，该物质被提取出后的纯化方法通常是____________________________________________________。

(5)在微生物培养过程中，常需要对微生物进行计数，血球计数板是常用的工具，血球计数板的计数室长和宽各为1 mm，深度为0.1 mm，其中25×16型的血球计数板计数室以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。一般计数时选取的中方格位于计数室的____________________。下图表示的是其中一个中方格的情况，对该中方格中的酵母菌进行计数的结果是________个。如果计数的几个中方格中的细胞平均数为20个，则1 mL培养液中酵母菌的总数为________个。

(6)抗生素可由微生物产生，具有抑菌作用，能在琼脂培养基中扩散。在筛选产生抗生素的菌种时，先在琼脂培养基平板上划线接种一种从土壤中获得的甲菌，在27 ℃下培养3天，形成菌落。然后接种乙、丙、丁三种致病菌(图A)，继续在同样条件下培养3天，结果如图B。分析结果，得出的结论是(　　)

①甲菌产生了抗生素　②丁菌的生长被丙菌产生的抗生素抑制　③乙菌的生长被甲菌产生的抗生素抑制　④丙菌产生的抗生素抑制了乙菌的生长

A．①③　　　　　　B．①④

C．②③　　　　　　D．②④

关于微生物的实验室培养技术，下列表述正确的是

A．溶化时将称好的牛肉膏从称量纸上直接倒入烧杯

B．常见的消毒方法包括灼烧、煮沸、紫外线和喷洒化学试剂等

C．配制固体培养基时加入琼脂，其目的是为微生物生长提供碳源

D．用移液管稀释菌液时，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀

 

（8分）如图表示花药离体培养及单倍体育种的大致过程，据图回答下列问题：

(1)过程①是把幼小的花药分离出来，在无菌条件下放在MS培养基上进行培养，配制该培养基时，需要的物质应该有                                  。(至少答三种)

(2)过程②是花药在MS培养基所提供的特定条件下脱分化，发生多次细胞分裂，形成               ，此过程进行细胞分裂的方式是                    。

(3)过程③是诱导再分化出芽和根，最后长成植株，长成的植株 (不考虑核与核之间融合)是         

              植株，其特点是植株弱小，高度不育，生产上无推广应用的价值，若要使其结子结果，可用                        处理幼苗。

(4)“激素杠杆”协同调控组织培养，在②过程中              含量较高，在③          的效应较高。