圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。

（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：

①分别配置                的培养基和             的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；

②分别向A、B培养基接种             ；

③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；

④从A、B培养基上生长的       中挑取生长良好的菌株，分别接种到        中；

⑤                                  。

（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。

PCR反应体系	50ul
缓冲液	5ul
脱氧核苷酸	1ul
引物A	0.5ul
引物B	0.5ul
DNA聚合酶	0.5U
模板DNA	1-2ul
加去离子水补足至50 ul

反应条件
	温度	时间
变  性	95℃	30s
复  性	55℃	30s
延  伸	72℃	1min
30个循环后	适宜	5-10min
保  温	4℃	2h

①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是               。

此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________           ________________。

②下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。

（3）在对固氮基因产物的生产研究中，需要从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质。下图表示蛋白质提取和分离实验涉及的相关原理。

①图甲表示相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶色谱法分离的过程。试管中收集到的液体最先出现的是相对分子质量较大的蛋白质，原因是                            。

②图乙所示实验模拟电泳现象，U型管左侧的颜色逐渐变深，原因是            。

资阳市某中学高二一班的同学在寒假预习了选修1《生物技术实践》中所要求的7个实验后，就自主地分了几个学习小组，有的小组用新鲜苹果榨取果汁并制作果酒、果醋，有的小组还尝试用苹果的嫩叶进行组织培养、用胡萝卜提取胡萝卜素等，有的成功，有的失败了。小王和小刘同学根据同学们的实验设计了以下问题。

（1）实验过程中，第一小组同学发现榨取的果汁非常浑浊，他们采用的解决方法是      

           或用纤维素酶处理果汁。活细胞内合成该酶的原料是            。分离这种酶常用凝胶色谱法，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较________，装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是气泡会搅乱洗脱液中蛋白质___________，降低分离效果，洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体__________（填“相同”或“不同”）。

（2）第二小组要将酵母菌从其他细菌中分离出来，常采用向培养基中添加          

的方法，这种培养基叫做             培养基，若要知道混合菌中是否含有大肠杆菌，可采用向培养基添加                 ，观察到菌落呈        则证明有大肠杆菌。配制培养基时常用的灭菌方法为                  。

（3）在酸性条件下，可用              来检测发酵产物中是否有酒精产生．若想进一步检测所得果酒中酵母菌的数量，可采用                   法。

（4）发酵完成后，该班同学制作的果酒品质非常好，为方便后续年级长期使用，可将菌液用     的方法保存。

（5）第三小组用苹果的嫩叶进行组织培养，有以下操作：①外植体消毒，②制备MS培养基，③接种，④培养⑤栽培⑥移栽。其操作的正确顺序是______ 。

A．①→②→③→④→⑤→⑥       B．②→①→③→④→⑤→⑥

C．②→①→③→④→⑥→⑤     D．①→②→③→④→⑥→⑤

适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗生根,而与                配比适宜时可促进芽的增殖。植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的            ；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。

（6）当人体缺乏某种维生素时，可由β-胡萝卜素在体内转化形成，这种维生素是     

           ，提取胡萝卜素过程中，萃取加热时需安装回流冷凝装置，其目的是防止加热时__________________________。