DNA亲子鉴定测试原理是：从被测试者的血液或口腔黏膜细胞或者培育的组织内提取DNA，用限制性内切酶将DNA样本切成特定的小片段，放进凝胶内，用电泳推动DNA小片段分离，再使用特别的“探针”去寻找基因。相同的基因会聚集在一起，然后用特别的染料在X光下，便会显示由DNA探针凝聚于一起的黑色条码；每个人的条码的一半与其母亲的条码吻合，另一半与其父亲的条码吻合。请回答：

⑴下列有关限制性内切酶的叙述中错误的是（    ）

A． 有高效性                         B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列

C．主要存在于某些微生物体内          D．限制酶主要破坏碱基对之间的氢键联系

⑵“探针”的化学本质是 （   ）

A． 某一个完整DNA                      B．含目的基因的特定DNA片段

C．由目的基因控制合成的蛋白质分子      D．与目的基因互补的特定单链DNA

⑶条码一半与其母亲的条码吻合，另一半与其父亲的条码吻合。为什么？              

                                                        。

⑷样品DNA经PCR技术（聚合酶链式反应）扩增，可以获得大量DNA分子克隆。其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA人工复制（如下图）。PCR技术中运用到的酶与人体中

（8分） DNA亲子鉴定测试原理是：从被测试者的血滴或口腔黏膜细胞或者培育的组织内提取DNA，用限制性内切酶将DNA样本切成特定的小片段，放进凝胶内，用电泳推动DNA小片段分离，再使用特别的“探针”去寻找基因。相同的基因会凝聚在一起，然后利用特别的染料在X光下，便会显示由DNA探针凝聚于一起的黑色条码。每个人的条码一半与其母亲的条码吻合，另一半与其父亲的条码吻合。反复几次过程，每一种探针用于寻找DNA的不同部位并形成独特的条码，便可得到超过99.9％的分辨概率。 请回答：

（1）限制性内切酶能将DNA样品切成特定的小片段，这主要体现了酶的  

  A．专一性    B．高效性       C．多样性       D．作用条件温和

（2）“探针”是指                                                    

  A．某一个完整的目的基因                  B．目的基因片段的特定DNA

  C．与目的基因相同的特定双链DNA           D．与目的基因互补的特定单链DNA

（3）条码一半与其母亲的条码吻合，另一半与其父亲的条码吻合。为什么?

（4）样品DNA经PCR技术扩增，可以获取大量DNA分子。该技术是在试管中进行DNA的人工复制(如图)，在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活动的生物体。

①图中A过程相当于生物体内的            过程。

②某样品DNA中共含300个碱基对，碱基数量满足：(A+T)：(G+C)=1/2，现欲得到100个与样品相同的DNA，至少需要向试管中加入               个腺嘌呤脱氧核苷酸。

③A过程也称为DNA的变性，此过程在温度高达90～95℃时才能完成，说明DNA分子具有一定的           性。

④由图中信息分析可知，催化C过程的酶是                 ，它与正常细胞里的酶区别是                  。

请分析回答下列有关基因工程问题：

Ι 基因工程是按人们预先设计的蓝图，将目的基因通过一定方法导入到另一种生物的细胞中，使之产生符合人类需要的新的遗传性状或创造出新的生物类型的现代技术。

57.基因工程常用的三种工具为限制性内切酶、　　　　　　 、质粒，通常选择质粒作为“目的基因的运输载体”是由于　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

58.基因工程一般包括四步：获取目的基因；目的基因与运载体重组；　　　　　　　 ；

　　　　　　　　　 　　。

Ⅱ 在基因工程中通常需要利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR如右图示，包括三个基本反应步骤：①模板DNA的变性：模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后双链解离；②模板DNA与引 物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，合成一条新的与模板DNA 链互补的脱氧核苷酸链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得较多的目的基因。

59.温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物时所遵循的原则是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

60.在PCR技术中，引物的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

61.从理论上推测，第三轮循环产物中含有引物B的DNA片段所占比例为　　　　　　　　 。

62.下图表示利用PCR技术获取目的基因X的第一次循环产物。则至少需要在　　　 轮循环产物中才能开始出现独立且完整的的X基因。如果经过n次循环，则产物中①所示DNA分子数为　　　　　　 。

63.用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点。