13.解析：本题考查基因工程的操作工具——限制性核酸内切酶的作用和来源。限制性核酸内切酶主要从原核生物中分离纯化，能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且在特定的切点将磷酸二酯键断开；酶的活性是受温度、酸碱度等的影响。

答案：C

12.解析：蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。蛋白质工程是从分子水平对蛋白质进行改造设计，通过对相应的基因进行修饰加工甚至人工进行基因合成，从而对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质以满足人类生产和生活需求，而基因工程只是将外源基因导入另一生物体内，并使之表达，体现人类所需的性状，或者获取所需的产品。因此，基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。

答案：B

11.解析：检测重组DNA是否已导入了受体细菌需从分子水平进行检测，首先要检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因，采用方法是DNA分子杂交技术。其次要检测目的基因是否转录出了mRNA，采用方法是DNA与mRNA杂交，最后检测目的基因是否翻译成了蛋白质，检测方法是抗原—抗体杂交。个体水平鉴定就是利用抗虫或抗病的接种实验确定是否具有抗性或抗性的程度。

答案：C

10.解析：本题考查基因工程的应用。在生物的体细胞中含有一整套的基因，只是基因的选择性表达才使不同的细胞具有不同的功能。

答案：D

9.解析：转基因抗虫棉可以产生毒蛋白毒死棉铃虫，少数具有抗性基因的棉铃虫能够存活并繁殖后代，从而使抗性基因频率很快上升，间隔种植少量非转基因的棉花或其他作物，没有抗性的棉铃虫能少量存活，以便减缓棉铃虫抗性基因频率增加的速度。在大田中种植棉花的主要目的是收获棉花，使能量流向棉花，而不是维持棉田物种多样性。

答案：B

8.解析：蛋白质工程是通过基因定点诱变或DNA重组技术改造基因，以定向改造天然蛋白质或创造新蛋白质的过程。

答案：D

7.解析：本题综合考查了基因表达载体构建的基础知识，包括基因表达载体构建在基因工程中的地位、结构组成、不同生物的基因表达载体的不同等。基因表达载体的构建是基因工程的第二步，也是基因工程的核心；一个基因表达载体的组成除目的基因外还有启动子、终止子、标记基因等部分；由于受体细胞不同，基因表达载体的构建也会有差别，不可能千篇一律。

答案：D

6.解析： 通过①过程获得的目的基因只是比目鱼基因组的部分基因，无法据此测定基因组碱基序列；由于每个抗冻基因的编码区在转录时，均会在其产物mRNA中出现终止密码子，故得不到抗冻能力增强的抗冻蛋白；重组质粒转入农杆菌的目的是通过农杆菌转化法将目的基因导入番茄细胞中；检测目的基因在番茄植株内是否完全表达，应进行抗原－抗体杂交实验或个体生物学水平检测。

答案：B

5.解析：本题综合考查了将目的基因导入细胞的方法。不同生物目的基因导入的方法不同，每种方法都有利有弊。目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，该方法比较经济有效，还有基因枪法和花粉管通道法；目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法；大肠杆菌细胞最常用的转化方法就是用钙离子处理细胞，使细胞的生理状态发生改变，完成转化过程。

答案：A

4.解析：①②为形成cDNA，①为逆转录需要逆转录酶，②为常温下DNA复制形成cDNA，③④⑤为PCR扩增，③为高温解旋，④为冷却退火，DNA单链与引物结合，⑤为以DNA单链为模板延伸，70～75 ℃扩增合成DNA。DNA中无U。

答案：B