3.PCR技术扩增目的基因

(1)原理：DNA双链复制

(2)过程：第一步：加热至90-95℃DNA解链；

第二步：冷却到55-60℃，引物结合到互补DNA链；

第三步：加热至70-75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

第二步：基因表达载体的构建

2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。

第一步：目的基因的获取

1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。

3.“分子运输车”--载体

(1)载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

(2)最常用的载体是­­质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

(3)其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒

2.“分子缝合针”--DNA连接酶

(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T_4-DNA连接酶)的比较：

①相同点：都缝合磷酸二酯键。

②区别：E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T₄DNA连接酶来源于T₄噬菌体，能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。

(2)与DNA聚合酶作用的异同:­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。

1.“分子手术刀”--限制性核酸内切酶(限制酶)

(1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。

(2)功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。

(3)结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。

写作要求： 只能用5句话表达全部的内容。

2009-2010学年高一年级第二学期英语期末测试答题卷

15. 什么，应该量入为出？--我们虽然穷，哈里，可我们还没穷到那么糟糕呢。

　　 Live within our means? ――We may be poor, Harry, but we are not that 　　 ______　______．

14. 它还可指冲突或不和，常涉及暴力行动。

It can also _______ ________ a conflict or disagreement, often involving

　violence

13. 财务负责人必须说明交给他的钱是怎样用的。

The treasurer has to　______　______ the money paid to him.