7.科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株--抗虫棉。其过程大致如图所示：　

根据题意回答下列问题：　

(1)基因工程的操作程序主要包括的五个步骤是　　　　　　　　　　　 、　　　　　　　　　　　　 、　　　　　　　

　　　　　　　　　 、　　　　　　　　　　　　　 、　　　　　　　　　　　　　　　 。　

(2)Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有T-DNA，把目的基因插入Ti质粒的T-DNA中是利用T-DNA　　　　　　　 的特点。　

(3)将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(4)目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　。

答案 (1)获得目的基因的　 形成重组DNA分子　 将重组DNA导入受体细胞　 筛选含有目的基因的受体细胞　 目的基因的表述　

(2)可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体的DNA上　

(3)农杆菌转化法 (4)目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上　 DNA分子杂交技术　

6.依据基因工程技术有关原理回答下列问题：　

(1)限制性核酸内切酶是在基因工程中用来切开DNA的酶，EcoRI是大肠杆菌的R型菌体分离而来的限制性核酸内切酶，它总是在一定的碱基序列中切断DNA。以下的碱基序列表示的是EcoRI的识别序列，请用箭头在下图中画出EcoRI的作用部位：　

G　 A　 A　 T　 T　 C　

　　 C　 T　 T　 A　 A　 G　

(2)获取目的基因途径有生物体内提取或　　　　　　 。　

(3)下图是将人类的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图，所用的载体为质粒A。已知细菌B内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题：　

①简述重组质粒的主要过程　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。　

②导入细菌B细胞的目的基因成功表达的标志是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(4)假如预期到某种酶的功能，要设计相应的基因，下列图示中：　

①是　　　　　　　　　　　　 ；②是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

答案 (1)G↓A　 A　 T　 T 　C　

C　 T　 T　 A　 A↑G

(2)人工合成　

(3)①用特定的限制性核酸内切酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口；用同种限制性核酸内切酶切割目的基因，产生相同的黏性末端；将切下的目的基因片段插入到质粒的切口处，再加入适量的DNA连接酶，使质粒与目的基因结合成重组质粒　 ②受体细胞通过转录、翻译合成相应的蛋白质，即人的生长激素　

(4)分子设计　 具有一定氨基酸序列的多肽链

5.(2009年广州模拟)胰岛素是治疗糖尿病的重要药物。如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。　

(1)判断某人患糖尿病的主要方法有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(2)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？　　　　　 ，为什么？　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(3)为使过程⑧更易进行，可用　　　　　　　 处理D的细胞壁。D细胞一般选用大肠杆菌或枯草杆菌的原因是　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　。

(4)下图A-D段表示质粒的某片段，若B表示启动子，为使目的基因直接表达，目的基因C插入的最佳位点是图中的　　

　　　 处(填数字序号)。　

(5)根治糖尿病的最佳方法是　　　　　　　　 。　

(6)基因工程其他方面的应用，如被用于培育转胰蛋白酶抑制剂基因的蔬菜，但若对该蔬菜处理不当，可能给人体带来的负面影响是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

答案 (1)空腹时的血糖浓度持续高于1.6-1.8 mg/100ml，且尿液中有糖　

(2)不能　 皮肤细胞中的胰岛素基因不表达，不能形成胰岛素mRNA　

(3)CaCl₂(或Ca²⁺)　 繁殖速度快，目的基因表达迅速　

(4)③ (5)基因治疗　

(6)胰蛋白酶抑制剂会抑制人的胰蛋白酶的活性，影响食物蛋白的消化　

4.(2008年姜堰模拟)萤火虫发光是体内荧光素酶催化一系列反应所产生的现象。如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光。一直以来荧光素酶的惟一来源是从萤光虫腹部提取。但加利福尼亚大学的一组科学家成功地通过转基因工程实现了将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内产生荧光素酶。请你根据已有的知识回答下列有关问题：

(1)在此转基因工程中，目的基因是　　　　　　　　 ，具体操作过程中下图所示的黏性末端是由　　　　 种限制性核酸内切酶作用产生的。　

(2)在上述过程中需要多种酶的参与，其中包括限制性核酸内切酶、DNA聚合酶和　　　　　　　　　 等。　

(3)将此目的基因导入到大肠杆菌体内需要载体的帮助。下列各项是选取载体时必须考虑的是　　　　　　　 (多选)。

A.能够在宿主细胞内复制并稳定保存　　　　　　　　　　 B.具有特定的限制酶切割位点　

C.具有与目的基因相同的碱基片段　　　　　　　　　　　 D.具有某些标记基因　

(4)本实验中将目的基因导入大肠杆菌的载体可以是　　　　　 (多选)。　

A.质粒　　　　　　　　　　　　 B.动物病毒　　　　　　 C.噬菌体　　　　　　　　 D.植物病毒　

(5)在此转基因工程中，将体外重组DNA导入大肠杆菌体内，并使其在细胞内维持稳定和表达的过程称为　　　　　　 。最常用的方法是首先用　　　　　　 处理大肠杆菌，目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(6)目的基因是否导入受体细胞，用　　　　　　　　　　　　 技术来检测。目的基因是否表达出相应的蛋白质，除了通过大肠杆菌是否发光来确定外，还可以通过　　　　 　　　　特异性反应来判断。　

答案 (1)荧光素酶基因　 2　

(2)DNA连接酶 (3)A、B、D (4)A、C　

(5)转化　 Ca²⁺　 使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围DNA分子的状态(处于感受态细胞状态)　

(6)DNA分子杂交　 抗原-抗体　

3.如图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：　

(1)在基因工程中，A→B为　　　　　　　　　　 技术，利用的原理是　　　 　　　　，其中①为　　　　　　　 过程。

(2)加热至94℃的目的是使DNA中的　　　　　　　 键断裂，这一过程在细胞内是通过　　　　　　　 的作用来完成的。

(3)当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板链延伸，最终合成两条DNA分子，此过程中的原料是　　　　　　　 ，遵循的原则是　　　　　　　　　　　　　 。　

(4)目的基因导入绵羊受体细胞常用　　　　　　　 技术。　

(5)B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是　　　　　　　　　 ，要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

答案 (1)PCR　 DNA复制　 DNA解旋　

(2)氢　 解旋酶　

(3)4种脱氧核苷酸　 碱基互补配对原则　

(4)显微注射　

(5)农杆菌转化法　 让害虫吞食转基因棉花的叶子，观察害虫的存活情况，以确定性状　

2.(2007年山东理综，35)继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：　

(1)将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞中，常用方法是　　　 　　　　　　　。　

(2)进行基因转移时，通常要将外源基因转入　　　　　　　 中，原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(3)通常采用　　　　　　　　 技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。　

(4)在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的　　　　　　　　　 细胞中特异表达。　

(5)为使外源基因在后代中长期保持，可将转基因小鼠体细胞的　　　　　　　 转入　　　　 　　　细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体，该技术称为　　　　　　　　 。

答案 (1)显微注射　

(2)受精卵(或早期胚胎)　 受精卵(或早期胚胎细胞)具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞中表达　

(3)DNA分子杂交(核酸探针)　

(4)膀胱上皮　

(5)细胞核　 去核的卵　 核移植(或克隆)　

1.下图为DNA分子的切割和连接过程，据图回答下列问题：　

(1)EcoRI是一种　　　　　　　　　　 　　　　酶，其识别序列是　　　　　　　　　 ，切割位点是　　　　　　　 与

　　　　　　 之间的　　　　　　 键。切割后产生的DNA片段末端形式为　　　　　　　 。　

(2)不同来源的DNA片段结合，在这里需要的酶应是　　　　　　　　　　 连接酶，此酶的作用是在　　　　　　　 与

　　　　　　　　　　 之间形成　　　　　　　 键，而起“缝合”作用的，还有一种连接平末端的连接酶是　　　　　　 。

答案 (1)限制性核酸内切　 GAATTC　 鸟嘌呤脱氧核苷酸　 腺嘌呤脱氧核苷酸　 磷酸二酯　 黏性末端　

(2)E ·coliDNA　 鸟嘌呤脱氧核苷酸　 腺嘌呤脱氧核苷酸　 磷酸二酯　 T₄DNA连接酶　

8.下列技术依据DNA分子杂交原理的是(多选)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 (　　 )

A.用DNA分子探针诊断疾病　　　　　　　　　　　　　　 B.淋巴细胞与骨髓瘤细胞的杂交　

C.快速灵敏地检测饮用水中病毒的含量　　　　　　　　　 D.目的基因与载体结合形成重组DNA分子

　答案　 AC

基因工程的综合考查　

例1 (2007年天津理综，30)在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan^r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。　

请据图回答：　

(1)A过程需要的酶有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。　

(2)B过程及其结果体现了质粒作为载体必须具备的两个条件是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　。

(3)C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入　　　　　　　　　 。　

(4)如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 作为探针。

(5)科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。　

①将转基因植株与　　　　　　　　　　　 杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1∶1。　

②若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为　　　　　　　 。　

③若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中抗卡那霉素型植株占　　　　　 %。

答案 (1)限制性内切酶和DNA连接酶　

(2)具有标记基因；能在宿主细胞中复制并稳定保存　

(3)卡那霉素　

(4)放射性同位素(或荧光分子)标记的抗虫基因　

(5)①非转基因植株　 ②3∶1　 ③100　

基因工程的应用及对转基因产品的认识　

例2 (2008年金山模拟)如图为基因工程中，利用农杆菌作为载体，培育出新性状植株的过程，请据图分析回答：　

(1)将携带外源基因的DNA导入植物细胞中所用到的工具酶有　　　　　　　　　　　　　　　　 。　

(2)图示中，目的基因导入植物细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，可以通过　　　　　　　　 来确定。导入目的基因的植物细胞一般需要通过　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 的方法，培育成能表现新性状的植株。

(3)利用基因工程进行育种，可以培育出具有新性状的植株，这种育种方法的优点是什么？　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(4)通过基因工程，科学家已经培育出了许多具有抗虫、抗病、抗除草剂等全新性状的农作物，但也有人对转基因产品的安全性提出了疑问，试从正反两方面阐述你对这一问题的认识。

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

答案 (1)限制性核酸内切酶和DNA连接酶　

(2)检测转化的植物有没有显示出目的基因控制的性状　 植物组织培养　

(3)①能打破生物种属的界限；②在分子水平上定向改变生物的遗传特性　

(4)安全：①多环节、严谨的安全性评价，可以保证转基因食品的安全；②转基因农作物要表现其新性状，必须有一定条件；③种植抗虫转基因农作物，可减少农药用量　

不安全：①可能会出现新的过敏原；②导入转基因生物的外源基因有可能与感染转基因生物的某些细菌或病毒杂交，从而重组出新的病原体；③重组的微生物降解化合物过程中会产生许多中间产物，造成二次污染　

基因工程、蛋白质工程的应用　

例3　 如图表示从苏云金芽孢杆菌分离出杀虫晶体蛋白基因(简称Bt基因)及形成转基因抗虫植物的图解。　

请回答：　

(1)在下列含有ATP和有关的酶的试管中，大量而快捷的获取Bt基因的最佳方案是下图中的　　　　　　　　　 (　　 )

(2)写出b过程表达式：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(3)科学家计划从哺乳动物的乳汁中提取某种抗体，应将控制抗体合成的基因导入该种动物的　　　　　　　　　　　 中

导入基因成功表达的标志是　　　　　　　　　　　　　　　　 。　

(4)在我国“863”计划资助下开展Bt抗虫棉育种等研究，这将对　　　　　　　　　　　　 、　　　　　　　　　　 和农业可持续发展产生巨大影响。　

答案 (1)D　

(2)Bt基因mRNA原毒素(晶体蛋白)　

(3)受精卵　 动物乳汁中含此种抗体　

(4)农业害虫防治　 环境保护　

7.下列关于基因工程应用的叙述，正确的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 (　　 )

A.基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因　

B.基因诊断的基本原理是DNA分子杂交　

C.一种基因探针能检测水体中的各种病毒　

D.原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良

　答案　 B　

6.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　(　　 )

A.基因非编码区对于抗虫基因在棉花细胞中的表达不可缺少　

B.重组DNA分子中增加一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失　

C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物，从而造成基因污染　

D.转基因棉花是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的

　答案　 D