4.下图为干细胞的培养过程，请分析回答：　

(1)图中　　　　　　　　　　　　 阶段的细胞是胚胎干细胞。　

(2)胚胎干细胞具有发育全能性的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(3)请你运用上述知识举一例说明胚胎干细胞在临床治疗上的应用　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

答案 (1)内细胞团 (2)胚胎干细胞中有该物种的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必须的全部基因　

(3)应用胚胎干细胞治疗白血病　

3.为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法：　

请根据图示信息回答:　

(1)试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的工程技术有　　　　　　　　　 、　　　　　　 　　　　等。　

(2)用来促进B牛多排卵的激素可能是　　　　　　 分泌的促性腺激素。E牛的性别是　　　　　　　　　　　　 。　

(3)产生F牛的理论依据是　　　　　　　　　　 ，其生殖方式属于　　　　　　　　　 。　

(4)要培育高产奶率的转基因牛，则目的基因的受体细胞一般是　　　　　　 ，转基因牛乳腺细胞中含有较多的参与分泌物加工的　　　　　　　　　　　　　　　　 等细胞器。　

答案 (1)细胞培养　 胚胎移植 (2)垂体　 雌性或雄性 (3)细胞的全能性　 无性生殖 (4)受精卵　 内质网、高尔基体、线粒体　

2.胚胎移植的基本程序如图所示，据图回答下列问题；　

(1)对供体母牛、供体公牛的要求是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(2)同期发情处理的方法是　　　　　　　　　　　　　 　　　，它可以促进　　　　　　 的分泌和　　　　　 的产生。

(3)若一次给受体移入多个胚胎，产生的多个后代，其基因型相同吗？为什么？　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。如果是用一个胚胎分割得到的多个胚胎，其基因型相同吗？为什么？　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

答案 (1)具优良遗传性状的同种牛　

(2)注射促性腺激素　 性激素　 卵子　

(3)不一定相同。因为这些胚胎可能由不同的受精卵发育来的，它们的基因型可能相同，也可能不同　 相同。来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质　

1.(2009年黄冈模拟)下图为牛胚胎性别鉴定和分割示意图，请据图完成下列问题：　

(1)填出图中字母所代表的结构名称：　

A　　　　　　　 ；B　　　　　　　 ；C　　　　　　 ；D　　　　　　　 ；　

(2)写出甲、乙、丙过程的技术名称：　

甲　　　　　　　　　　　 ；乙　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ；丙　　　　　　　　　　 　　；

进行乙过程时，所取的样本是　　　　　　 。　

(3)进行甲过程时，所使用的基本仪器是　　　　　　　　　 ，本过程的技术关键是　　　　　　　　　　　　　　　 。

(4)尽管胚胎分割技术在多种动物中取得成功，但仍然存在一些问题，如　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 等；同时很难取得同卵多胎，成功率较高的是　　　　　　 。　

答案 (1)囊胚腔　 透明带　 滋养层　 内细胞团 (2)胚胎分割　 做DNA分析进行性别鉴定　 胚胎移植　 滋养层

(3)显微操作仪和实体显微镜　 将内细胞团均等分割　

(4)刚出生的动物体重偏轻，毛色和斑纹上还存在差异　 同卵双胎　

8.现有甲、乙两种可能有一定毒性的化学物质，实验室研究人员欲通过动物细胞培养的方法来鉴定它们是否有毒性，并比较二者毒性的强弱。请你以一个研究人员的身份参与此项研究，完成下列实验报告并回答有关问题。　

Ⅰ.实验原理：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

根据这种变异细胞占全部培养细胞的百分数(以下称Q值)，可判断该化学物质的毒性。　

Ⅱ.实验材料：活的小白鼠胚胎。　

Ⅲ.药品用具：胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、培养瓶、恒温箱、载玻片、盖玻片、显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂各时期高倍显微照片。　

Ⅳ.实验步骤　

(1)制备细胞悬浮液　

把活的小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入胰蛋白酶液处理，使胚胎组织分散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬浮液。　

(2)进行细胞培养　

①取A、B、C三个洁净的培养瓶，　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　。

②向A培养瓶中加入化学物质甲，向B培养瓶中加入等量的化学物质乙，并将培养瓶摇匀。　

③向C瓶内　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(3)制作临时装片　

①当细胞增殖到大约第8代左右时，同时从恒温箱中取出三个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，使培养的细胞从瓶壁上脱落，再加入动物细胞固定液以便迅速杀死细胞并固定细胞。　

②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬浮液，滴在与培养瓶有相同编号的载玻片的中央，　　　　　　　　　　　　 ，3-5 min后，盖上盖玻片。　

(4)镜检和统计　

把临时装片放在显微镜下，先用低倍镜后用高倍镜，寻找处于　　　　　　　　　　　 期的细胞，并与　　　　　　 对比以确认发生变异的细胞，同时统计该期变异的细胞占该期细胞总数的百分数(Q值)。　

Ⅴ.结果与结论　

经研究人员实验得知：A、B、C三个培养瓶的Q值依次为：Q_A=1.3%、Q_B=12.5%、Q_C=0.1%，由此可知该实验的结论是　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

Ⅵ.回答问题　

在实验中，C培养瓶起什么作用？　　　　　　　 。

　答案　 Ⅰ.有毒物质能诱导细胞产生变异　

Ⅳ.(2)①消毒灭菌，加入等量的细胞悬浮液　

③加入等量的生理盐水　

(3)②用适宜浓度龙胆紫溶液染色　

(4)细胞有丝分裂中　 C组　

Ⅴ.甲、乙都是有毒性的，且乙的毒性大于甲　

Ⅵ.对照

第三章　 胚胎工程

体外受精及胚胎发育　

例1 　一头特殊的由体细胞克隆产生的牛犊在山东省莱阳农学院高青科技成果转化基地--淄博小黑牛牧业科技有限公司降生。这头通体黑亮的小牛犊采用了转基因克隆技术，使其体内带有抗疯牛病的基因。据介绍，新降生的抗疯牛病体细胞克隆牛是莱阳农学院的董雅娟教授和柏学进教授继2001年11月成功克隆出我国首例和第二例健康成活体细胞克隆牛之后的又一项重大成果。转基因动物的研制，是将人类需要的外源基因，通过显微注射等方法导入到动物受精卵细胞核中，然后把注射后的受精卵移植到受体雌性动物体内，让其发育生长。　

根据以上叙述回答下列问题：　

(1)该技术首先要通过体外受精获得受精卵。从雌性动物体内采集的是　　　　　　 ，且要在体外经　　　　　　　 后，才能与　　　　　　 的精子受精。　

(2)胚胎移植是胚胎工程及其他技术的最后一道工序，可以充分发挥雌性优良个体的　　　　　　　 。供体的主要职能是　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ，而受体则承担着妊娠和育仔的任务。在实施该技术时，要用激素对供、受体雌性动物进行处理，使它们　　　　　　　 。为了提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，用于胚胎分割的胚胎应是　　　　　　　　　　　　　 。　

答案 (1)卵母细胞　 人工培育成熟　 获能　

(2)繁殖潜力　 产生具有优良遗传特性的胚胎　 同期发情　 发育良好、形态正常的囊胚或者桑椹胚　

胚胎工程的应用

例2 (2009年徐州模拟)下图为经过体外受精和胚胎分割移植培育优质奶牛的过程。请回答下列问题：　

(1)A细胞是　　　　　　　　 ，在进行体外受精前要对精子进行　　　　　　　 处理。　

(2)进行胚胎分割时，应选择发育到　　　　　　 时期的胚进行操作。　

(3)②指的是　　　　　　　　　　　　 。　

(4)通过胚胎分割产生的两个或多个个体共有的特点是　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　。

(5)在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(6)受体母牛必须和供体牛属于　　　　　　　 。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

答案 (1)(次级)卵母细胞　 获能 (2)囊胚 ?(3)囊?胚腔　(4)具有相同的遗传物质 (5)胚胎分割要将内细胞团均等分割，以免影响胚胎的恢复和进一步发育　

(6)同一种物种　 受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应

7.下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图，据图回答下列问题：　

(1)　　　　　　　　　 技术是进行单克隆抗体制备的基础。　

(2)根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 培养基。

(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　。

(4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用　　　　　　 。　

(5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞　　　　　　　 的特点，又具备淋巴细胞　　　　　　　　 的特点。　

(6)淋巴细胞是由动物体　　　　　　 中的　　　　　　 细胞分化、发育而来的。　

(7)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是　　　　　　　　　　　　　　　 。

　答案 (1)动物细胞培养(微生物培养) (2)选择　

(3)特异性强、灵敏度高 (4)灭活的病毒　

(5)在体外大量增殖 分泌特异性抗体　

(6)骨髓　 造血干 (7)主动运输　

6.(2007年海南高考)某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：　

(1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量　　　　　　 。　

(2)在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

细胞培养应在含5%CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的作用是　　　　　　　　　　　　 。　

(3)在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长　　　 　　　　　　。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更　　　　　　 。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用　　　　　 消化处理。　

(4)为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的　　　　　　 。　

(5)已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入　　　　　　　 ，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的　　　　　　　 或　　　　　　　 合成水平的差异，确定Y的药效。

　答案　 (1)多

(2)血清可以补充合成培养基中缺乏的物质　 维持培养液pH　

(3)停止　 多 　胰蛋白酶　

(4)抗生素　

(5)药物Y　 mRNA　 蛋白质　

5.如图为细胞融合的简略过程，请据图回答：　

(1)若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用　　　　　　　　　　　　 处理，除去了　　　　　 ；　

A、B到C的过程中，常用的物理方法是　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　，融合完成的标

志是　　　　　　　　 。　

(2)若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用　　　　　　　　　　 技术把D培养成植株。　

(3)若A、B是动物细胞，一般取自　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ，然后用　　　　　　　　　　　 使其分散开来；从A、B到C的过程中，常用的但不用于植物细胞培养的手段是　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　，所形成的D称为　　　　　　　　 。　

(4)若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了　　　　　　　 。由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程称为　　　　　 。这种细胞既能无限繁殖，又能分泌　　　　　　　　　　 。图中B为　　　　　　　 。　

(5)若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有　　　　　　 种(只考虑两个细胞的相互融合)，用来培养的D细胞应该是　　　　　　　 。从中选择出它的方法是　　　　　　　　　　　 培养。获得D后，常用的培养方法　　　　　　　　　　　　 和　　　　　　　　　　　 。　

答案 (1)纤维素酶和果胶酶　 细胞壁　 电刺激、振动、离心　 产生新的细胞壁　

(2)植物组织培养　

(3)动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 胰蛋白酶 用灭活的病毒诱导杂种细胞融合 杂种细胞　

(4)抗原　 克隆(细胞培养) 特异性抗体(单克隆抗体)　

骨髓瘤细胞　

(5)3　 杂交瘤细胞　 用特定的选择培养基　 培养基中培养　 小鼠腹腔内增殖　

4.请填写有关细胞工程的内容：　

(1)生物体的每一个细胞都包含有该物种的　　　　　　　　　　　　　　 ，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有　　　　　　　 。　

(2)植物组织培养技术的应用范围是很广的，除了快速繁殖、培育无病毒植物、通过大规模的植物组织培养来生产药物、食品添加剂、香料、色素和杀虫剂等外，还可应用于　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　等(至少答出一项)。

(3)动物细胞培养一般分为　　　　　　　　　　 和　　　　　　　　　　 两个阶段，培养时除需要适宜的温度、营养、无菌、无毒等环境条件以外，还要向培养液中通入氧气和二氧化碳。通入氧气的原因是　　　　　　　　　　　　　　　 。通入二氧化碳的原因是　　　　　　　　　 。　

(4)在动物细胞培养过程中，先后两次用胰蛋白酶，配制成细胞悬浮液，其作用分别是　　　 　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(5)植物体细胞杂交的重要意义在于　　　　　　　　　　　　　　　　 ，与诱导植物原生质体融合方法相比，动物细胞融合还常用　　　　　　　　　 作为诱导剂。　

答案 (1)全套遗传物质　 全能性 (2)制成人工种子、转基因植物的培育及植物体细胞杂交 (3)原代培养　 传代培养保证细胞能够进行有氧呼吸(细胞代谢必需) 维持培养液的pH(保证各种酶的正常活性) (4)使组织分散成单个细胞；使细胞从瓶壁上脱离下来 (5)克服了远缘杂交不亲和的障碍　 灭活的(仙台)病毒

3.下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：　

(1)图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是　　　　　　　　　 。　

(2)图甲中②过程常在　　　　　　　 诱导下完成，④过程与体外培养相比，其优点是　　　　　　　　　　　　　 。

(3)单克隆抗体能定向攻击癌细胞，主要是利用其　　　　　　　 。　

(4)若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗？　　　　　　　　　 。原因是　　　　　　　　　　 　。

(5)图乙过程的技术具有多种用途，但是不能　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 (　　 )

A.有选择地繁殖某一性别的家畜　　　　　　　　　　　　　　 B.繁殖家畜中的优良个体　

C.用于保存物种　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 D.改变动物的核基因　

(6)在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 (　　 )

A.卵细胞大，便于操作　　　　　　　　　　　　　　　　　　 B.卵细胞含有的营养物质多　

C.卵细胞的细胞质可使体细胞核全能性得到表达　　　　　　　 D.重组细胞才具有全能性　

答案 (1)动物细胞培养 (2)聚乙二醇(或灭活的病毒，物理方法如离心、振动，电刺激也可)　 不需特定的培养基，不需严格的外界环境条件 (3)导向作用 (4)不是　 卵细胞细胞质的遗传物质也能控制某些性状(5)D (6)C