32．(14分)在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。

请据图回答：

(1)A过程需要的酶有_______________________________________________。

(2)B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是____________________

____________________________________________________________。

(3)C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入________________。

(4)如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用________________

________________________________________________作为探针。

(5)科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。

①将转基因植株与________________________杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1。

②若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为________。

③若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中抗卡那霉素型植株占____________%。

31．(8分)[生物-现代生物科技专题]

继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：

(1)将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是　　　　　　　　 。

(2)进行基因转移时，通常要将外源基因转入　　　　 中，原因是　　　　　　　　 。

(3)通常采用　　　　　 技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。

(4)在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的　　　　　 细胞中特异表达。

30．(8分)将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。

请根据以上图表回答下列问题。

(1)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是　　　　　　 　　　　　　　。

(2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。

(3)图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？　 。

(4)为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为　　　　　　　 。

(5)对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。

29、图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，　 amp^R为青霉素抗性基因，tct^R 为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。

据图回答：

(1)将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有　　　 、　　　　 、　　

　　　 三种 。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行　　　　 。

(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是　　　　 ；

(3)在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是　　　　　　　　 。

28、以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。

(1)获得目的基因的方法通常包括　　　　　　 和　　　　　　　　　 。

(2)切割和连接DNA分子所使用的酶分别是　　　　 　　　和　　　　　　　 。

(3)运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或　　　　 ，后者的形状成　　　 。

(4)由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率　　 ，所以在转化后通常需要进行　　 操作。

(5)将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者中生产的胰岛素在功能和　　　 序列上是相同的。

26.天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用。研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转人酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精。请回答下列问题：

(1)将淀粉酶基因切割下来所用的工具是　　　　　　　　　 ，用　　　　　　　　 将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子　　　　　　　　　 ，以完成工程菌的构建。

(2)若要鉴定淀粉酶基因是否插人酿酒酵母菌，可采用的检测方法是　　　　　　　　　 ；若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用　　　　　 　　　　　　　检测。将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一定时间后，加入碘液，工程菌周围出现透明圈，请解释该现象发生的原因。

(3)如何进一步鉴定不同的转基因工程菌菌株利用淀粉能力的大小?

(4)微生物在基因工程领域中有哪些重要作用?

27为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。

(1)获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的　　　　 处，DNA连接酶作用于　　　　　 处。(填“a”或“b”)

(2)将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和　　　 法。

(3)为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的　　　 作探针进行分子杂交检测，又要用　　　　 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。

25、下列关于生物技术的安全性和伦理问题的分析，合理的观点是(　 )

A 转基因生物进入自然界后不会与野生物种杂交而威胁其他生物的生存

B 运用重组基因技术可以将致病菌或病毒改造成威力巨大的生物武器

C 所有的转基因食品都不会危害人类的健康

D 转基因生物合成的某些新的蛋白质有可能成为某些人的过敏源或者引起中毒