2．5 灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。

2．4 调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。

2．3 溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

2．2 称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。

2．1 计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。

2．实验操作

1．8灭菌方法：

(1)接种环、接种针、试管口等使用 灼烧 灭菌法；

(2)玻璃器皿、金属用具等使用 干热 灭菌法，所用器械是 干热灭菌箱 ；

(3)培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法，所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 。

(4)表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法，所用器械是 紫外灯 。

[思考6]对接种环灭菌时要用酒精灯的 充分燃烧 层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。

[思考7]利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。

[思考8]物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 有利于锅内温度升高 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 100k Pa，温度为 121℃ ，并维持 15-30 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 零 时打开锅盖，其目的是防止 容器中的液体暴沸　 。

[补充]培养基的配制原则：

①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。

②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。

③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。

1．7 消毒方法：

(1)日常生活经常用到的是 煮沸 消毒法；

(2)对一些不耐高温的液体，则使用 巴氏 消毒法(作简要介绍)；

(3)对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果，然后使用 紫外线 进行物理消毒。

(4)实验操作者的双手使用 酒精 进行消毒；

(5)饮水水源用 氯气 进行消毒。

1．6 比较消毒和灭菌(填表)

[思考5]无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是 防止感染实验操作者 。

1．5 无菌技术包括：

(1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ；

(2)将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌 ；

(3)为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行；

(4)避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。