同学们在“设计某地人工生态林”时提出以下观点：①选择适合本地生长的树木种类；②尽量增加树木种类；③选择树种时注意不同品种生长的高度。上述观点提出时遵循的主要生态工程建设原理是                                                 (　　)

A．协调与平衡原理　　　　                   B．物质循环再生原理

C．物种多样性原理                               D．整体性原理

科学家通过探究DNA载体途径的RNA干扰技术抑制端粒酶的活性，从而抑制肿瘤细胞生长增殖，以寻找一种抑制肿瘤增长的新途径。

方法思路：

①构建干扰质粒________{插入针对人体端粒酶逆转录酶亚基(hTERT)的mRNA的干扰序列}和对照质粒PSG－CTR(插入不针对人体任何DNA序列的对照组序列)。

②用空质粒PSG(不含目的基因)、干扰质粒PSG－AS和对照质粒分别感染肝癌细胞。

③一段时间后观察检测细胞的________。计算细胞凋亡率，绘制肝癌细胞生长曲线。结果如下图：

请回答下列问题。

(1)完成方法思路中的空格：

①________；③_____________________________________________________。

(2)在构建质粒时，要将质粒导入大肠杆菌细胞并用________培养基进行筛选鉴定，然后再提取。因此，在构建的表达载体质粒上必须含有________。

(3)端粒酶可以通过以自身的________为模板，________为原料来合成端粒DNA。

(4)分析DNA载体途径的RNA干扰技术能否抑制肿瘤细胞的增殖？

多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如下图。据图回答下列问题：

(1)若已获取PG的mRNA，可通过________获取PG基因。重组质粒转移到大肠杆菌中的目的是____________。

(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有________的培养基进行筛选，理由是______________。之后，还需将其置于质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞________现象来鉴别细胞壁是否再生。

(3)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与________互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。若________，则可确定转基因番茄培育成功。

(4)将转入反向链接PG基因的番茄细胞培育成完整的植株，需要用________技术；其中，愈伤组织经________形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加____________________。

在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值。右图所示是获得转基因莴苣的技术流程，请据图回答下列问题：

(1)获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和________。

(2)①过程需要的酶有__________、__________。

(3)重组质粒除了带有抗冻蛋白基因afp以外，还必须含有启动子、终止子和________，这样才能构成一个完整的基因表达载体。

(4)如果受体细胞C₁是土壤农杆菌，则将目的基因导入它的目的是利用农杆菌的________，使目的基因进入受体细胞C₂，并将其插入到受体细胞C₂中________上，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达，形成转基因莴苣。经②过程获得的转基因莴苣中的目的基因是否表达，在分子水平上可用________法进行检测，如果出现杂交带，说明目的基因已经表达蛋白质产品，转基因莴苣培育成功。

降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图：

↓
获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点－GAATTC－)和BamHⅠ(识别序列和
↓
切割位点－ GGATCC－)双酶切后插入大肠杆菌质粒中。下列有关分析错误的是 (　　)

A．Klenow酶是一种DNA聚合酶

B．合成的双链DNA有72个碱基对

C．EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是保证目的基因和运载体的定向连接

D．筛选重组质粒需要大肠杆菌质粒中含有标记基因

右图表示细胞膜上乙酰胆碱(一种神经递质)受体基因的克隆技术操作过程，下列相关分析中正确的是　　　　　 (　　)

A．获得该mRNA的最佳材料是受精卵

B．构建基因表达载体最可能使用的载体是大肠杆菌

C．完成过程①②必不可少的酶分别是逆转录酶、DNA聚合酶

D．探针筛选的目的是淘汰被感染的细菌，获得未被感染的细菌

某研究所的研究人员将生长激素基因通过质粒导入大肠杆菌细胞，使其表达，产生生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因：甲是抗链霉素基因，乙是抗氨苄青霉素基因，且目的基因要插入到基因乙中，而大肠杆菌不带有任何抗性基因。下列叙述正确的是(　　)

A．导入大肠杆菌的质粒一定为重组质粒

B．RNA聚合酶是构建该重组质粒必需的工具酶

C．可用含氨苄青霉素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒

D．在含氨苄青霉素的培养基中不能生长，但在含链霉素培养基中能生长的可能是符合生产要求的大肠杆菌

下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示一种限制性核酸内切酶的酶切位点。若要得到一个能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA的细胞，应选用的质粒是                                             (　　)

某种微生物合成的蛋白酶与人体消化液中的蛋白酶的结构和功能很相似，只是其热稳定性较差，进入人体后容易失效。现要将此酶开发成一种片剂，临床治疗食物消化不良，最佳方案是                                                             (　　)

A．替换此酶中的少数氨基酸，以改善其功能

B．将此酶与人蛋白酶进行拼接，形成新的蛋白酶

C．重新设计与创造一种蛋白酶

D．减少此酶在片剂中的含量

某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶(Amy)基因a，通过基因工程的方法，将a转到马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在，下列说法正确的是                                                                    (　　)

A．基因a只有导入到马铃薯受精卵中才能表达

B．目的基因来自细菌，可以不需要载体直接导入受体细胞

C．基因a导入成功后，将抑制细胞原有的新陈代谢，开辟新的代谢途径

D．目的基因进入受体细胞后，可随着马铃薯的DNA分子的复制而复制，传给子代细胞并表达